组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）在食管鳞癌组织中的表达及其意义

论文摘要

食管鳞癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,在世界恶性肿瘤的发病率中居第六位,是当今世界上对人类健康危害最大的恶性肿瘤之一。中国是食管癌的高发区,高发区遍及我国大江南北十余个省市,尤其在河南省林州市。食管鳞癌在诊断时经常出现在晚期,并伴随着快速的进展和较差的预后。随着医疗水平的提高,食管癌的治疗现状较过去已有明显改善,当前主要采用外科手术联合一些其它的辅助治疗手段,如放疗和化疗等,但食管癌的预后仍然保持的十分低下。迄今为止,尚没有理想的预后和长期存活的指标来检测和诊断食管癌病人,因而在治疗上仍没有明显的进展。研究表明,食管鳞癌较低的预后不仅与对放疗和化疗的抗性有关,而且与肿瘤细胞通过淋巴和静脉向远端扩散密切相关,这将直接导致淋巴结和远端转移。因而,鉴定与食管鳞癌浸润转移相关的分子显得尤为重要,而且对于食管鳞癌的临床治疗、预防以及患者生存率和生存质量的提高都具有十分重要的意义。组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylation, HDAC）根据其和三个酿酒酵母的HDACs序列的相似性主要分为三大类：Ⅰ型HDACs、Ⅱ型HDACs和Ⅲ型HDACs。其中Ⅰ型HDACs主要包括：HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC8,它们与酵母转录调节子yRPD3密切相关。Ⅱ型HDACs主要由HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9和HDAC10组成,它们主要和yHDA1具有相似的结构域。另外,HDAC11是与Ⅰ型HDACs关系最为密切,然而由于其序列的同源性较底,目前尚未确定其分类。Ⅲ型HDACs是与NAD+依赖的ySIR2相似。近年来,越来越多的研究显示,HDAC6作为重要的Ⅱ型组蛋白去乙酰化酶家族的成员在肿瘤的发生发展中发挥极其重要的作用,抑制组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylation, HDAC）的活性或表达已经成为恶性肿瘤治疗的十分有用的分子靶点。目前HDAC6已在神经胶质瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、口腔鳞癌等多种不同的肿瘤中具有高表达,提示其与肿瘤的发生发展关系密切。然而,迄今为止,国内外尚未见HDAC6在食管鳞癌中的研究报道,为了初步闸明HDAC6在食管鳞癌中的可能作用,本研究利用原位杂交技术、免疫组织化学技术、半定量RT-PCR及Western blotting方法研究食管鳞癌组织中lHDAC6 mRNA和蛋白的表达,并分析其表达与食管鳞癌临床病理学参数之间的关系,该研究旨在为以HDAC6为靶点的食管鳞癌基因治疗提供理论依据。方法：（1）采用原位杂交技术检测75例食管鳞癌组织、43例癌旁不典型增生组织以及75例正正常食管黏膜上皮组织中HDAC6 mRNA的表达,并分析其与临床病理学参数之间的关系。（2）采用免疫组织化学方法检测75例食管鳞癌组织、43例癌旁不典型增生组织以及75例正常食管粘膜上皮组织中HDAC6的表达,并分析其与临床病理学参数之间的关系。（3）利用SPSS 13.0软件分析HDAC6 mRNA和蛋白表达的相关性。（4）采用半定量RT-PCR方法检测随机选取的3例食管鳞癌标本和相对应的3例正常食管黏膜上皮组织标本中HDAC6 mRNA的相对表达水平。（5）采用Western blotting方法检测随机选取的3例食管鳞癌标本和相对应的3例正常食管黏膜上皮组织标本中HDAC6蛋白的相对表达水平。（6）统计学处理：应用SPSS 13.0软件分析,采用χ2检验、t检验和方差分析以及相关性分析。P<0.05表示具有统计学差异。结果：（1） HDAC6 mRNA主要定位于食管鳞癌细胞的胞质中,呈蓝紫色颗粒。HDAC6 mRNA在食管鳞癌组织中的表达的阳性率为92.00%,显著高于癌旁不典型增生组织（20.93%）和正常食管上皮组织（13.33%）,三组之间表达的差异具有统计学意义（χ2=107.122,P=0.000）。（2） HDAC6蛋白主要定位于食管鳞癌细胞的胞质中,呈棕黄色颗粒。HDAC6蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为88.00%（66/75）,显著高于癌旁不典型增生组织和正常食管上皮组织中HDAC6蛋白的表达,后二者的阳性率分别为：23.26%（10/43）和12.00%（9/75）,三组之间表达的差异具有统计学意义（χ2=97.587,P=0.000）。（3） HDAC6 mRNA表达与TNM分期和淋巴结转移均具有明显的相关性（χ2分别为6.020和4.112,P值分别为0.014和0.043,均<0.05）,但与组织学分级、浸润深度无关（χ2分别为0.956和0.379,P值分别为0.620和0.538,均>0.05）。（4）HDAC6蛋白的表达与TNM分期和淋巴结转移均具有明显的相关性（χ2分别为5.576和6.448,P值分别为0.018和0.011,均<0.05）,但与组织学分级、浸润深度无关（χ2分别为0.699和0.594,P值分别为0.705和0.441,均>0.05）。（5） HDAC6 mRNA和蛋白的相关性分析表明：在75例食管鳞癌组织中,HDAC6 mRNA表达阳性的69病例中,其蛋白表达阳性例数为64例,而HDAC6 mRNA表达阴性的6病例中,其蛋白表达阴性的例数为4例。HDAC6 mRNA及蛋白在食管鳞癌组织中的表达强度呈正相关关系（γ=0.496,P=0.000）。（6）随机选取的食管鳞癌组织中HDAC6 mRNA在样品1、2和3中的相对表达量分别为1.912±0.044、0.347±0.013和0.872±0.021,而正常食管黏膜上皮组织中仅在样品3中呈现了HDAC6 mRNA的弱表达,其相对表达量为：0.208±0.015,其余两个样品的正常食管黏膜组织中HDAC6 mRNA的相对表达均为0,经统计学处理发现食管鳞癌组织和相对应的正常食管黏膜组织中HDAC6 mRNA的表达具有显著性差异（P<0.05）。（7）随机选取的食管鳞癌组织中的HDAC6蛋白在样品1、2和3中的相对表达量分别为1.635±0.033、0.781±0.027和1.109±0.041,而正常食管黏膜组织中仅样品3中呈现出HDAC6蛋白的表达,其相对表达量为0.129±0.015,在食管鳞癌组织中HDAC6蛋白的表达均显著高于对应的正常食管黏膜组织中HDAC6蛋白的表达,其表达的差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：（1） HDAC6 mRNA和蛋白在食管鳞癌中的表达显著高于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织,其高表达可能在食管鳞癌发生发展中发挥重要作用。（2） HDAC6 mRNA和蛋白的表达均与TNM分期和淋巴结转移有关,与组织学分级和浸润深度无关,提示HDAC6可能是一种判定食管鳞癌恶性程度极其重要的分子标记。（3） HDAC6 mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中的表达呈正相关关系。（4）半定量RT-PCR和Western blotting结果表明HDAC6高表达于食管鳞癌组织中,提示HDAC6可以与食管鳞癌的发生发展密切相关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文缩略词
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 HDAC6在肿瘤发生中的作用及最新研究进展
• 参考文献
• 个人简历和攻读硕士研究生期间发表的论文
• 致谢