小球藻培养密度与代谢物提取方法的研究

论文摘要

本课题研究了不同接种密度对小球藻生长状况以及细胞形态造成的差异,对小球藻的生长状态进行了测定,同时测定了小球藻中脂肪酸含量及脂肪酸种类随接种密度的变化。并采用气质联用技术,建立了以GC/MS技术为基础的,高通量、高灵敏度的小球藻代谢物的分析方法。主要研究成果为:(1)测定了不同接种密度对小球藻生长速度的影响。对文献中常见的浊度法和细胞计数法进行比较,最终确定了采用细胞计数法测定小球藻生长状况,为以后进一步的研究打下了基础。(2)通过正交试验,对尼罗红染色快速检测小球藻脂肪酸含量的方法进行了优化,最终确定尼罗红染色条件为以丙酮为溶剂,在25℃条件下黑暗孵育10min,在550nm下激发,605nm下散射。(3)通过GC/MS对小球藻中脂肪酸的组成进行了分析,发现小球藻中脂肪酸具有高度不饱和性,且单位重量的细胞总脂肪酸含量随着接种密度的升高而先升高后降低。(4)建立了基于GC/MS为基础的,高灵敏高通量的小球藻代谢物提取方法通过比较发现,需要综合考虑几种提取方法加以比较才能最终确定方法,并没有一种提取方法适合小球藻中所有的小分子代谢物。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 小球藻概述
• 1.1.1 小球藻的分类及生活史
• 1.1.2 小球藻的经济价值
• 1.1.3 小球藻的培养方式
• 1.2 代谢物组学
• 1.2.1 代谢物组学概况
• 1.2.2 代谢物组学研究方法
• 1.2.3 代谢物组学研究应用
• 1.3 本课题的研究目标、意义和创新性
• 第二章 不同接种密度对小球藻生长的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 传统培养方式
• 2.1.4 小球藻生长状况测定方法的确立
• 2.1.5 不同接种密度小球藻生长曲线的测定
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 显微镜镜检小球藻
• 2.2.2 OD540 与细胞计数的关系
• 2.2.3 OD560 与细胞计数线性关系
• 2.2.4 OD750 与细胞计数线性关系
• 2.2.5 不同接种密度的小球藻生长动力学
• 2.2.6 小结
• 第三章 不同接种密度培养小球藻中脂肪酸的变化
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 试剂配制
• 3.1.3 试验仪器
• 3.1.4 尼罗红染色快速测定脂肪酸含量
• 3.1.5 GC/MS检测脂肪酸的方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 尼罗红正交结果分析
• 3.2.2 不同密度接种对小球藻脂肪酸含量的影响
• 3.2.3 不同密度接种的小球藻中脂肪酸GC/MS分析
• 3.2.4 小结
• 第四章 小球藻代谢物提取方法的建立
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 溶液配制
• 4.1.3 试验仪器
• 4.1.4 培养基配制
• 4.1.5 小球藻破壁方法的确立
• 4.1.6 代谢物提取方法
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 不同提取方法对氨基酸的提取效率的影响
• 4.2.2 不同提取方法对胺类物质的提取效率的影响
• 4.2.3 不同提取方法对有机酸的提取效率的影响
• 4.2.4 不同提取方法对碱基等的提取效率的影响
• 4.2.5 不同提取方法对多糖的提取效率的影响
• 4.2.6 不同提取方法对二糖的提取效率的影响
• 4.2.7 不同提取方法对其它小分子物质的提取效率的影响
• 4.3 小结
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 致谢