论文摘要
在基因工程中,蛋白质的表达经常用到各种融合表达系统。GST基因融合表达体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便以及利于抗体制备等优点,得到越来越广泛的应用。用GST融合表达系统表达外源基因时,对融合表达产物的检测和纯化非常重要。目前GST基因融合表达系统表达的融合蛋白均使用市售的特定的亲和层析系统纯化如Glutathione Sepharose-4B亲和层析柱,Glutathione亲和柱存在价格昂贵、使用寿命有限、不适合大规模应用等不足。为此,本试验拟制备抗GST标签蛋白的特异性单克隆抗体,为利用单抗建立亲和层析、免疫磁珠等表达产物大规模提纯系统的研制做好前期工作,研究结果如下。1.抗GST单克隆抗体的研制用含pGEX质粒的表达菌BL21表达,并经Glutathione Sepharose-4B亲和层析柱纯化得到高纯度的GST标签蛋白,用纯化的GST蛋白免疫Balb/c小鼠,制备免疫脾细胞,通过常规的细胞融合技术与SP2/0骨髓瘤细胞融合;用相同的纯化的GST蛋白进行筛选,所得的阳性杂交瘤细胞株,采用有限稀释法进行了克隆,建立了2株能持续分泌抗GST蛋白的McAb的杂交瘤细胞株3E和10G。2.GST单克隆抗体的特性鉴定3E和10G株单抗腹水与GST蛋白反应的间接ELISA效价均在1×106以上,鉴定其亚类类型均为IgG1,染色体数目为80～94条。10G株细胞腹水与含GST标签的融合蛋白（AIV-NS1、IBDV-VP2、IBV-NP）的反应性都很低,而3E株细胞腹水与三种融合蛋白反应的间接ELISA效价均达到2×105以上。3.抗GST单克隆抗体的初步应用用辛酸-硫酸铵法纯化出3E株细胞的腹水单抗,测得纯化后单抗对GST蛋白和IBDV-VP2蛋白的效价分别为1.28×105和6.4×104。而且3E株细胞单抗对GST蛋白和IBDV-VP2蛋白的相对亲和力差别不大。3E株细胞单抗可用于GST融合蛋白的检测,以及后续的利用单抗作为配基来纯化GST融合蛋白。