CLSM在牙髓细胞Ca2+浓度及牙体充填材料微渗漏研究中的应用

论文摘要

激光扫描共聚焦显微镜（Confocal Laser Scanning Microscopy,CLSM）是目前生物学领域应用最广泛和图像分辨率最高的实验仪器之一。其优良特性使它在口腔医学研究中逐渐得到广泛应用。本实验从细胞生物学及人工充填材料的边缘封闭性等着手,研究CLSM在牙髓细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及牙体充填材料微渗漏检测中的应用,以期进一步丰富牙体牙髓的基础研究并为临床实践提供指导。目的:应用CLSM检测羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HA）对体外培养的人牙髓细胞内游离钙离子(Ca2+)的作用,观测HA是否参与牙髓细胞内Ca2+调节过程;观察银汞合金、复合树脂和玻璃离子三类常用牙体充填材料在体外充填后的微渗漏情况,比较材料的边缘封闭性,为临床选择材料提供参考;定量观测CLSM和万能金相显微镜（Metallugical Microscope）这两种不同显微镜下体外充填材料微渗漏的情况,通过对两种仪器使用情况的比较,提出微渗漏优选研究手段。方法:体外培养人牙髓细胞中加入HA,使用CLSM定量及动态检测HA引起的牙髓细胞[Ca2+]i的变化;以银汞合金、复合树脂和玻璃离子三类临床常用充填材料分组充填离体牙窝洞,利用CLSM定量观测充填材料与牙体界面的微渗漏状况;优选玻璃离子水门汀分组充填离体牙窝洞,采用CLSM和万能金相显微镜测量充填体边缘微渗漏情况。结果:对体外培养的人牙髓细胞而言,无论瞬时还是钙剂与细胞共孵育后加入HA,细胞[Ca2+]i均表现为升高。其中瞬时加入HA后[Ca2+]i荧光强度增加率分别为:空白组60%、Ca（OH）2组13%、HA组8.7%。比较银汞合金、复合树脂和玻璃离子三类常用牙体充填材料与牙体界面的封闭性,三者均有不同程度的荧光染料渗入,渗漏程度由小到大依次为玻璃离子（23.63±3.06μm）、银汞合金（31.68±10.97μm）、复合树脂（32.86±11.67μm）;玻璃离子与复合树脂相比有显著差异;在亚组中,使用玻璃离子预处理与银汞合金直接充填相比有显著差异,自酸蚀与全酸蚀粘结树脂的比较也有显著统计学意义。两种不同光学显微镜在体外充填材料与牙体边界虽均能检测到染液渗漏,但在分别充填传统型玻璃离子水门汀和树脂改性玻璃离子水门汀的情况下,万能金相显微镜测得的渗漏值分别为33.18±5.59μm和32.30±3.76μm,与CLSM所得渗漏深度22.57±2.59μm及21.93±1.51μm相比,有显著统计学意义（P＜0.05）。结论:HA可引起体外培养人牙髓细胞[Ca2+]i的显著变化,认为其参与了牙髓细胞的Ca2+转导过程;对牙体充填材料而言,玻璃离子水门汀有较好的边缘封闭性,且在充填银汞合金前使用其预先粘结可明显减小微渗漏;全酸蚀复合树脂比自酸蚀与牙体的密合性更好;使用CLSM作为体外充填体微渗漏实验观测仪器,标本制作方法简便、可定量检测且特异性高,在此类研究的应用中优势明显。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验一 激光扫描共聚焦显微镜观测羟基磷灰石对人牙髓细胞内游离钙的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果及统计学分析
• 3 讨论
• 4 结论
• 实验二 三类常用牙体充填材料界面微渗漏的激光扫描共聚焦显微镜观测
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 实验三 牙体充填材料微渗漏的激光扫描共聚焦显微镜与金相显微镜比较研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 结论
• 综述
• 参考文献
• 发表文章目录
• 致谢