EGCG对SAMP8鼠原代海马神经元的保护作用

论文摘要

阿尔茨海默病（Alzheimer disease, AD）是一种脑部原发性神经退行性病变,主要病理特征包括三方面:老年斑形成、神经元的变性或丢失以及神经纤维缠结。EGCG是茶多酚的主要成分,在机体中有广泛的生物活性,利于预防与氧化应激有关的疾病,比如阿尔茨海默病、帕金森症等。随着全球老龄化的来临及社会竞争压力的增大,AD的发病率日益增加,并已影响到患者及家人的生活质量,因此开发AD的治疗药物迫在眉睫。[目的]观察EGCG对于SAMP8小鼠的海马神经元在衰老过程中的保护作用。[方法]提取一天新生SAMP8、SAMR1小鼠海马原代神经元。将海马神经元接种于直径为35mm培养皿中,培养液为含20%胎牛血清的DMEM,24h后更换培养液为Neurobasal+2%B27,培养72h后再次换液,细胞培养到第4天时加入不同浓度的EGCG,共培养13天。1.用MTT方法测定适宜的EGCG浓度;2.应用免疫组化的方法观察EGCG对神经元的保护作用;3.用蛋白质杂交的方法检测tau蛋白磷酸化途径中的cdk5、pTauS199、ptauS396、pGsk3βS9的表达。[结果]1.MTT实验表明:用不同浓度的EGCG处理SAMP8小鼠海马神经元后发现:浓度>20μg/mL的EGCG会抑制神经元的生长并导致其死亡,而浓度为<20μg/mL时对神经元的保护作用不明显,浓度为20μg/mL的EGCG能显著促进神经元的生长。2.免疫组化:实验组（SAMP8+20μg/mLEGCG）用EGCG处理后明显抑制了SAMP8鼠原代海马神经元细胞的衰老,结果与正常对照组（SAMR1）水平一致。3.Western blot :EGCG处理后cdk5、pTauS396、pTauS199、Gsk3β的磷酸化水平明显降低,接近正常对照组（SAMR1）水平。4.mRNA水平检测:EGCG能够提高Bcl-2的水平。[结论]1.SAMP8小鼠的海马神经元在培养过程中细胞衰退凋亡较早,本实验由细胞活力和形态学两方面得出适宜浓度的EGCG能延缓该现象的出现。2.EGCG的对原代海马神经元保护作用是通过降低tau蛋白磷酸化水平来实现的。EGCG可激活PI3K/Akt信号通路,抑制GSK-3β活性;还可抑制另一蛋白激酶Cdk5活性,从而达到降低tau蛋白磷酸化的目的。3.EGCG通过提高Bcl-2的表达水平减少细胞凋亡的出现。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 阿尔茨海默病的现状
• 2 阿尔茨海默病（AD）的病因及病理特征
• 2.1 阿尔茨海默病的病因
• 2.2 胆碱能假说
• 2.3 AD 的病理特征
• 3 AD 研究模型
• 3.1 细胞模型
• 3.2 动物模型与 SAMP8 鼠
• 4 表没食子儿茶素没食子酸酯在阿尔茨海默病上的应用
• 4.1 EGCG 简介
• 4.2 EGCG 的生物活性
• 4.3 EGCG 在AD 上的研究现状
• 引言
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药品和仪器
• 1.3 试剂配制
• 2 实验方法
• 2.1 原代细胞的分离培养
• 2.2 MTT 细胞活力测试
• 2.3 免疫荧光化学检测
• 2.4 mRNA 水平检测
• 2.5 蛋白质含量的测定-免疫印迹法检测目的蛋白的表达
• 2.6 实验分组
• 2.7 统计学处理
• 3 实验结果
• 3.1 EGCG 剂量对细胞活性的影响
• 3.2 EGCG 对原代海马神经元生长形态的影响
• 3.3 EGCG 对Bcl-2 mRNA 水平的影响
• 3.4 Western Blot 实验结果
• 3.4.1 EGCG 对 SAMP8 原代海马神经元tau 蛋白磷酸化的影响
• 3.4.2 EGCG 对 PI3k/Akt 信号通路的影响
• 3.4.3 EGCG 对原代海马神经元 GSK-3β活性的影响
• 3.4.4 EGCG 对原代海马神经元 Cdk5 表达和活性的影响
• 3.4.5 EGCG 对抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达影响
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 后记