川芎嗪对肝星状细胞核转录因子-κB、转化生长因子-β1的影响

论文摘要

目的:研究川芎嗪（Tetramethylpyrazine,TMP）对人肝星状细胞（Hepatic Stellate Cells,HSC）核转录因子-κB（Neuclear factor-κB,NF-κB）、转化生长因子-β1（Transforminggrowth factor-β1,TGF-β1）信号传导的影响。通过检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscle actin,α-SMA）蛋白表达的变化,TGF-β1及其Ⅰ型和Ⅱ型受体、Smad 3及Smad 7 mRNA表达的变化,NF-κB p65蛋白表达以及核转移情况,探讨川芎嗪抗肝纤维化作用的相关机制。方法:1、体外培养HSC:采用表型活化的人肝星状细胞Lx-2进行体外培养。于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素的DMEM培养液中37℃、5%CO2条件下培养。2、实验分组:实验分为不同浓度TMP组、阳性对照组、阴性对照组。3、α-SMA表达的检测:将Lx-2细胞悬液接种于培养板,制备细胞爬片。预培养24h后分别按拟定剂量加入各组药物,继续培养48h。SP免疫细胞化学染色检测,抗α-SMA抗体稀释度为1:100。染色后以半定量分级及评分判定结果。4、NF-κB表达及核转移:制备细胞爬片,分别加入各组药物后继续培养48h,SP免疫细胞化学染色检测,抗NF-κB p65抗体稀释度为1:100,根据染色结果分析NF-κB表达及核转移。5、TGF-β1及其Ⅰ型和Ⅱ型受体、Smad 3及Smad 7 mRNA表达:将Lx-2接种于培养板,经分组、加药,培养48 h后收集细胞,提取细胞总RNA,并进行RNA的定量及纯度分析,然后将其逆转录成cDNA并进行扩增,产物经凝胶电泳后进行密度定量。结果:1、TMP对HSC中α-SMA表达的影响:与阴性对照组相比,TMP组和阳性对照组Lx-2细胞中α-SMA表达显著降低（P＜0.01）;TMP 200 mg/L、400 mg/L、800 mg/L浓度组与阳性对照组相比,其差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。这一作用具有良好的剂量相关性。2、TMP对HSC中NF-κB表达及核转移的影响:阴性对照组可见细胞核内NF-κB较强阳性表达,TMP组及阳性对照组NF-κB细胞核阳性表达不同程度降低;与阴性对照组相比,TMP组和阳性对照组Lx-2细胞中NF-κB表达显著降低（P＜0.01）;TMP浓度组与阳性对照组相比,其差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。3、TMP对HSC中TGF-β1mRNA表达的影响:与阴性对照组相比,TMP组、阳性对照组TGF-β1 mRNA相对表达量均有显著性差异（P＜0.01）;与阳性对照组相比,TMP 800 mg/L浓度组TGF-β1 mRNA相对表达量显著降低,差异有显著性（P＜0.01）。4、TMP对HSC中TGF-βⅠ型受体（TβRⅠ）mRNA表达的影响:与阴性对照组相比,TMP 200 mg/L、800 mg/L组TβRⅠmRNA相对表达量降低,其差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）;与阳性对照组相比,TMP 800 mg/L组TβRⅠmRNA表达量有显著性差异（P＜0.01）。5、TMP对HSC中TGF-βⅡ型受体（TβRⅡ）mRNA表达的影响:与阴性对照组相比,阳性对照组及TMP 200 mg/L、TMP 800 mg/L浓度组的TβRⅡmRNA相对表达量均有显著性差异（P＜0.01）;与阳性对照组相比,TMP 200 mg/L、800 mg/L浓度组TβRⅡmRNA表达量有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。6、TMP对HSC中Smad 3 mRNA表达的影响:与阴性对照组相比,阳性对照组Smad 3 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）,TMP 200 mg/L、800 mg/L浓度组的Smad 3 mRNA相对表达量均有显著性差异（P＜0.01）;与阳性对照组相比,TMP800 mg/L浓度组Smad 3 mRNA表达量有显著性差异（P＜0.01）。7、TMP对HSC中Smad 7 mRNA表达的影响:与阴性对照组相比,TMP 200mg/L、800 mg/L浓度组Smad 7 mRNA表达量显著升高,其差异有显著性（P＜0.01）;与阳性对照组相比,TMP 800 mg/L组Smad 7mRNA表达量的差异具有显著性（P＜0.01）。结论:川芎嗪可使肝星状细胞活化标志α-SMA表达显著降低,降低NF-κB表达并抑制其核转移,降低肝星状细胞TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体及Smad 3 mRNA表达,同时促进Smad7 mRNA表达,表明川芎嗪可抑制肝星状细胞的活化,这可能与阻断NF-κB信号通路、阻断TGF-β/Smad通路的信号传导有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1的影响'>论文部分 川芎嗪对肝星状细胞核转录因子-κB、转化生长因子-β₁的影响
• 前言
• 一、实验材料
• 二、实验方法
• 三、实验结果
• 四、讨论
• 五、结论
• 参考文献
• 图片资料
• 综述 中药有效成分调控肝纤维化相关细胞因子研究进展
• 参考文献
• 英文缩略词
• 本课题研究期间论文发表情况
• 致谢