40个春剑品种的AFLP分析

论文摘要

本研究对采自雅安和成都邛崃、温江、寿安等地的40个春剑品种进行了AFLP分析,探讨了春剑品种的遗传多样性和亲缘关系,结果如下:1、建立了适用于春剑AFLP反应的优化程序和反应体系,得到的结果清晰可靠,重复性高,稳定性好。2、选取了12对选择性扩增引物对40份春剑材料进行AFLP分析,共扩增出大小约为200bp～1200bp的片段共515条,其中多态性带242条,占总数的45.45%,每对引物可扩增出24～80条带,平均扩增出42.92条带。3、40个春剑品种的聚类结果表明,除红花品种分化出了部分个体与杂花聚在一起,其余样品均按花色聚类。全部供试材料的遗传相似系数变幅在0.7858～0.9563之间,平均遗传相似系数为0.8837,说明供试春剑品种间的遗传差异较小,遗传分化不显著。4、基于同类花色的遗传相似系数分析结果表明,杂色花不同材料间的平均遗传相似系数最小,为0.9012;遗传相似系数变幅最大,为0.8667～0.9563,说明在杂色花不同品种间的遗传分化较大,遗传多样性较高。不同花色之间的遗传相似系数分析结果表明,绿花和红花间的平均遗传相似系数最小,为0.8840,它们之间的亲缘关系最远;红花和杂花间以及绿花和杂花间的平均遗传相似系数相对较大,说明红花和杂花间以及绿花和杂花间的亲缘关系均相对较近。5、遗传相似系数和聚类结果均显示,春剑的种间遗传分化不显著,遗传差异较小,遗传多样性偏低,且不同地理来源的材料间差异不大。由于供试品种均采自人工栽培环境,长期相同的栽培环境和传粉条件的一致性及人为可控性使得不同春剑品种间遗传差异较小,这有利于保持春剑品种的观赏特性和较高的种质资源纯度。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 春剑的形态学特性及生物学特性
• 1.2 春剑的地理分布
• 1.3 春剑分类学上的地位
• 1.4 兰花遗传多样性及亲缘关系研究进展
• 1.4.1 AFLP技术概述
• 1.4.2 AFLP分子标记在兰花上的研究应用
• 1.4.3 RAPD分子标记在兰花上的研究应用
• 1.4.4 其他技术研究在兰花上的研究应用
• 2 本研究的目的和意义
• 3 材料与方法
• 3.1 供试材料
• 3.2 试剂及设备
• 3.2.1 引物和接头
• 3.2.2 试剂
• 3.2.3 仪器设备
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 样品采集与离体叶片的保存
• 3.3.2 春剑DNA的提取
• 3.3.3 DNA浓度测定和质量检测
• 3.3.4 DNA的双酶切
• 3.3.5 DNA酶切产物的连接
• 3.3.6 预扩增
• 3.3.7 选择性扩增
• 3.3.8 聚丙烯酰胺凝胶的制备
• 3.3.9 电泳
• 3.3.10 银染
• 3.4 数据分析
• 3.4.1 遗传相似度
• 3.4.2 多态性计算
• 3.4.3 聚类分析
• 4 结果与分析
• 4.1 模板DNA的制备
• 4.2 DNA酶切
• 4.3 AFLP扩增反应条件的优化
• 4.4 选择性扩增引物筛选
• 4.5 遗传多样性
• 4.5.1 春剑品种遗传多样性
• 4.5.2 不同花色类春剑遗传多样性
• 4.6 亲缘关系
• 5 讨论
• 5.1 建立春剑AFLP分析体系
• 5.1.1 适合于春剑AFLP分析的高质量基因组总DNA的提取
• 5.1.2 DNA的双酶切
• 5.1.3 反应条件的优化
• 5.1.4 关于银染
• 5.2 春剑遗传多样性
• 5.3 春剑品种亲缘关系
• 5.3.1 亲缘关系和品种鉴定
• 5.3.2 与传统分类的比较
• 6 结论和进一步研究方向
• 6.1 结论
• 6.2 存在的不足和有待进一步研究的方向
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表文章情况
• 附录