宫颈癌血清差异蛋白的表达及宫颈癌HeLa细胞放射前后的蛋白质组学初步研究

论文摘要

目的：1.利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析宫颈上皮内瘤变（CN）Ⅲ期、早期宫颈癌患者及健康人的血清蛋白质谱,筛选潜在的特异性肿瘤标志物,探讨其临床意义。2.利用双向凝胶电泳（2-DE）及基质辅助激光解析离子化/飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术筛选、鉴定宫颈癌Hela细胞放射前后差异表达的蛋白质,从蛋白质组水平分析宫颈癌放射治疗的分子机制。方法：1.检测宫颈上皮内瘤变及宫颈癌早期患者血清蛋白质谱的表达（1）样品收集：CINⅢ期患者23例,早期宫颈鳞癌患者34例,正常对照35例。采集测试对象静脉血,4℃离心后取上清,-80℃冰箱保存。（2）用SELDI-TOF-MS结合弱阳离子交换（WCX）芯片,检测血清蛋白质峰,在Ciphergen Software 3.1.1软件中设定读片程序,读取芯片数据并绘制出蛋白质质谱图。利用Biomark Wizard软件分析差异蛋白峰,在Swiss蛋白数据库中搜索鉴定差异蛋白。（3）受试者工作（ROC）曲线评价差异蛋白峰的应用价值。2.宫颈癌Hela细胞放射前后的蛋白质组学分析对Hela细胞进行剂量为6Gy的6MV-X线照射后,应用2-DE技术对Hela细胞放射前、后两组细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱；采用PDQuest （8.0.1）软件进行匹配和差异分析,寻找两组的表达差异蛋白质点。从凝胶中切取差异蛋白点进行胶内原位酶解,应用MALDI-TOF-MS对酶解产物进行分析,获取肽质量指纹图谱,在数据库中搜索鉴定差异蛋白质。结果：1.在所有检测标本中共测得76个蛋白质质谱峰值,在质荷比（m/z） 2000-20000Da范围内,宫颈癌患者的血清中筛选出与正常人血清有统计学意义的差异蛋白10个,其中5个高表达：m/z分别为2951.5、3882.4、5310.3、7757.1、15910.4Da；5个低表达：m/z分别为3824.6、4211.8、4512.4、4786.4、5565.3Da。应用ROC曲线分析,评估10个差异蛋白对宫颈癌具有中等诊断价值：灵敏度为64.7%～97.1%,特异度为79.4%～94.3%。在CINⅢ中升高,但在宫颈癌下降的差异蛋白有3个：m/z分别为4584.9、5897.5、9176.6Da。2.建立了分辨率高、重复性好的放射前后的Hela细胞双向凝胶电泳图谱。放射组蛋白斑点数为1248±67个,未放射组蛋白点数为1207±78个,组间平均匹配率为86.8%。质谱分析成功鉴定10个差异表达蛋白,其中6个蛋白质在放射组高表达,分别是：角蛋白10、角蛋白18、膜联蛋、核糖体蛋白、La核糖核蛋白、精氨酸脱氢酶；4个蛋白质在放射组低表达,分别是：2种钙网蛋白、磷酸甘油酸变位酶、琥珀酸脱氢酶。结论：1.正常人、CINⅢ期及宫颈癌早期组血清中存在差异蛋白质,SELDI-TOF-MS联合WCX芯片能在宫颈癌患者和健康人群血清中筛选出灵敏度和特异度较好的差异表达蛋白,其有助于宫颈癌的筛查、早期诊断。2.放射治疗可能通过改变多种蛋白的表达,参与细胞凋亡、细胞周期调控、信号转导等过程,影响细胞的增殖、分化。进一步弄清信号转导过程和相互关系,不仅对从蛋白质组水平了解宫颈癌放射治疗的分子机制有重要意义,而且为从分子水平治疗宫颈癌提供新思路。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 实验一 宫颈癌血清差异蛋白的表达
• 资料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 实验二 宫颈癌Hela细胞放射前后的蛋白质组学初步研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图表
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表