急性高眼压后大鼠视网膜突触可塑性及其影响因素的初步探索

论文摘要

第一部分急性高眼压后大鼠视网膜内突触标记蛋白的表达变化目的:通过观察突触囊泡素(synaptophsin,SYN)、囊泡性谷氨酸转运体1(VGLUT1)和蛋白激酶Cα(PKCα)的表达变化,初步了解急性眼高压后大鼠视网膜的突触可塑性变化。方法:成年SD大鼠,根据不同的存活时间分组。左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压,并维持60分钟,右眼设为正常对照组。实验动物分别存活1、3、7或14天后处死,视网膜冰冻切片行SYN免疫组织化学和SYN mRNA原位杂交检测,行SYN与感光细胞终末标记物VGLUT1和双极细胞标记物PKCα免疫双标检测。结果:急性高眼压后大鼠视网膜突触可塑性变化主要表现在:损伤后早期外网层SYN蛋白表达增高、分布范围增宽(正常情况下无表达的视网膜外核层也出现SYN分布),7天达到高峰,14天回落。SYN与VGLUT1及PKCα双标检测显示,急性高眼压后VGLUT1与SYN表达变化模式相同,二者在正常组和各存活时间点都能双标;而PKCα在损伤后分布范围无明显改变。结论:急性高眼压后大鼠视网膜出现突触可塑性变化,主要表现为损伤后早期视网膜外网层突触前成分功能性蛋白的表达上调和分布范围增大,但这种变化可能局限于突触前成分。第二部分急性高眼压后大鼠视网膜内突触的形态学改变目的:采用电子显微镜观察正常及急性高眼压损伤后不同存活时间点大鼠视网膜外网层带状突触的形态和数目变化及外核层超微结构的改变情况,为急性高眼压损伤后大鼠视网膜内的突触可塑性变化提供最直观的形态学依据。方法:成年SD大鼠,根据不同的存活时间分组。左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压,并维持60分钟,右眼设为正常对照组。实验动物分别存活1、3、7或14天后处死,取视网膜颞下象限,固定、包埋、超薄切片,在常规电子显微镜下观察视网膜外网层带状突触和外核层结构的形态学变化。结果:电子显微镜下正常视网膜外网层可见大量带状突触结构:在突触前成分靠近突触前膜附近可见长为数十到几百纳米的基本与突触前膜垂直电子致密带,围绕带分布的突触囊泡排列整齐、致密,突触前、后膜增厚,突触前、后膜之间可见较为清晰的突触间隙。急性高眼压后视网膜外网层带状突触的形态和数目基本正常。电子显微镜下正常视网膜外核层由紧密排列的感光细胞细胞核构成,无轴突终末和突触结构分布。急性高眼压后3天和7天,视网膜外核层可见包含囊泡的轴突终末样结构,但未发现典型突触结构。结论:急性高眼压后电子显微镜下观察到的视网膜外核层异位分布的包含囊泡的轴突终末样结构可能是视网膜外网层突触前功能性蛋白的分布范围增宽的形态学基础。第三部分急性高眼压后大鼠视网膜内突触可塑性影响因素的初步探索目的:从脑源性神经营养因子(BDNF)和胆固醇两个方面入手,初步探索急性高眼压后大鼠视网膜突触可塑性的影响因素。方法:成年SD大鼠,根据不同的干预因素(左眼溶媒预处理、BDNF预处理和BDNF抗体预处理)和不同存活时间分组。预处理后2天,左眼眼压升高至闪光视网膜电图b波消失的临界眼压,并维持60分钟,右眼设为正常对照组。实验动物分别存活1、3、7或14天后处死。不同组别视网膜冰冻切片行SYN免疫组化、GFAP免疫组化或FilipinⅢ染色检测。结果:BDNF预处理后,在急性高眼压后早期,SYN在视网膜外网层分布范围增宽的现象延后,至14天,阳性产物分布面积达到高峰;BDNF抗体预处理后,SYN阳性产物分布范围增宽现象前移,在3天时达到高峰,但与正常水平差异无统计学意义,至7天和14天SYN回落;急性高眼压后FilipinⅢ染色显示,视网膜胆固醇含量上升,7天达到高峰,14天有所回落;急性高眼压后视网膜GFAP表达增高,提示视网膜胶质细胞激活。结论:BDNF在急性高眼压后可能通过保护视网膜节细胞及稳定视觉信号传递通路,延缓逆行性跨神经元突触改变的发生;视网膜胶质细胞则可能通过释放胆固醇参与突触可塑性的调节。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 急性高眼压后大鼠视网膜内突触标记蛋白的表达变化
• 1.1 材料和方法
• 1.2 实验结果
• 1.3 讨论
• 参考文献
• 第二部分 急性高眼压后大鼠视网膜内突触的形态学改变
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 参考文献
• 第三部分 急性高眼压后大鼠视网膜内突触可塑性影响因素的初步探索
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 参考文献
• 结论
• 综述 视网膜的突触可塑性
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果