蛋白聚糖Ⅱ重组腺病毒载体对糖尿病视网膜病变的作用

论文摘要

研究背景和目的糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最为常见和严重的微血管并发症，已成为四大主要致盲因素之一。随着人民生活水平的提高，糖尿病发病率急剧上升，尽管在用激光光凝和玻切手术治疗DR方面取得了进展，但是糖尿病患者失明的危险性仍然比正常人高25倍。因此，研究DR的发病机制对防治该病具有重要意义。近来研究表明DR的发生发展与细胞增殖调控失常有关，而生长因子与视网膜多种细胞的生长增殖有密切关系，在诸多影响视网膜微血管病变的细胞因子中，转化生长因子β（transforming growth factorβ，TGF-β）已经得到肯定。TGF-β是一种多功能的细胞间信号蛋白，具有多种生物学效应，在糖尿病视网膜病变发生发展过程中发挥的作用也十分复杂，主要通过对细胞增殖分化和细胞外基质的影响，促进新生血管腔形成，参与细胞凋亡等发挥作用，并与其他生长因子协调共同作用等。蛋白聚糖Ⅱ，又称decorin（DCN），是内源存在的蛋白聚糖，通过参与调控细胞的增殖、分化，调节基质形成、胶原纤维的结构和生成速度，发挥抗纤维化，抑制新生血管形成等的作用。Decorin不仅可以结合TGF-β2，抑制其生物活性，而且能够抑制TGF-β2mRNA的转录和翻译，减少TGF-β2的表达。Border等的实验证明注射一定剂量的Decorin均能使TGF-β1，TGF-β2，TGF-β3活性降低，从而阻断TGF-β与其受体的相互作用，达到抑制纤维化的目的。外源性补充decorin在糖尿病视网膜病变中日益受到重视。基因治疗具有巨大的开发潜力及应用前景，将外源性的基因导入生物细胞有许多技术方法或载体。为进一步研究TGF-β2在DR发生发展过程的表达变化以及外源性增加decorin是否对TGF-β2的作用，本实验利用大鼠DCN重组腺病毒载体（本实验成员前期已构建并鉴定）感染糖尿病大鼠，观察不同时间点TGF-β2Mrna表达变化及外源性增加decorin是否对TGF-β2发挥作用，为临床预防、治疗糖尿病视网膜病变提供一种可能方法。因此我们设计并进行如下实验：1．链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型，于造模成功后8W注射DCN重组腺病毒载体感染糖尿病动物模型，并注射相同剂量的ad-LacZ的作为对照组，分别于8W，12W，16W，20W测血糖和体重，并取视网膜标本进行实验。2．利用RT-PCR方法检测各组不同时间点TGF-β2mRNA的表达。实验结果1)各组血糖及体重的变化：各时间点糖尿病组及ad-DCN，ad-LacZ组大鼠体重与正常对照组相比，差异有显著意义（P＜0.01）。正常对照组大鼠血糖较平稳各时间点比较差异无显著意义（P）0.05)，糖尿病组，ad-DCN及ad-LacZ组大鼠血糖维持在高水平，与正常对照组比较，差异有显著意义（P＜0.01）。糖尿病组与ad-DCN组、ad-LacZ组的血糖与体重水平无明显差异（P）0.05)。2)各组不同时期的TGF-β2mRNA的表达：与正常对照组相比，糖尿病组，ad-DCN及ad-LacZ组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA的表达于8W时下降，12周时糖尿病组，ad-DCN组与ad-LacZ组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA的表达高于正常对照组，且差异有统计学意义（P＜0.05），但12周时AD-DCN组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA的表达低于糖尿病组与ad-LacZ组。在16周和20周时糖尿病组，ad-DCN组与ad-LacZ组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA的表达继续升高，高于正常组，ad-DCN组大鼠视网膜中TGF-β2mRNA的表达低于糖尿病组与ad-LacZ组。结论1．糖尿病大鼠视网膜TGF-β2早期有所下降，可能是周细胞数目减少导致TGF-β2分泌下降造成，于12周及以后TGF-β2表达水平又高于正常对照组，提示TGF-β2的增加与DR后期的病情发展有关，而在DR后期的病理改变主要以细胞的增殖性改变有为主。2．DCN重组腺病毒载体感染糖尿病大鼠后可降低TGF-β2mRNA在视网膜中的表达水平，表明DCN重组腺病毒载体可以感染糖尿病大鼠并在体内发挥作用，对预防糖尿病视网膜病变的发生有一定作用。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、论文正文
• 四、相关综述
• 五、发表文章
• 六、致谢