论文摘要
目的:动物的一种内分泌腺——松果体,能分泌一种名为“Epithalamin”的缩氨酸,这种成分可被人工合成名叫“Epithalon”的四肽（Ala-Glu-Asp-Gly）。有报道Epithalon在动物体内具有一定的肿瘤抑制作用,本文的目的就是研究Epithalon作用于人肝癌细胞HepG2后,对HepG2细胞的生长情况、细胞端粒长度以及细胞端粒酶活性所产生的影响。同时,通过和Epithalon作用于人胎肝细胞L-02后细胞生长情况、端粒长度以及端粒酶活性的变化进行对比,研究Epithalon对细胞端粒和端粒酶的影响,探寻其可能的作用机制。方法:（1）采用Fmoc固相多肽合成法制备Epithalon四肽,高效液相层析（HPLC）纯化处理,运用NMR和质谱进行分析鉴定。（2）通过MTT法检测Epithalon四肽对人肝癌细胞株HepG2以及人胎肝细胞L-02增殖与活力的影响;用细胞形态学观察用药后细胞的生长情况,流式细胞仪检测细胞周期。（3）根据MTT检测结果,特定浓度用药一段时间后,运用端粒酶重复序列扩增-焦磷酸根酶联发光技术（TRAP-ELIDA）检测人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞L-02端粒酶活性,流式荧光原位杂交法（FLOW-FISH）检测端粒长度。结果:（1）核磁与质谱结合分析鉴定表明,合成产物确为Epithalon四肽。（2）MTT法检测Epithalon四肽对人肝癌细胞株HepG2增殖与活力的影响显示:低浓度（0.00256～0.0256μmol/L）和高浓度（25.6μmol/L）的Epithalon对细胞生长影响不大,而0.256～2.56μmol/L的Epithalon对HepG2细胞有一定抑制作用。流式细胞仪检测细胞周期表明,Epithalon有一定的S期阻滞作用。Epithalon对人胎肝细胞株L-02增殖与活力的影响显示:2.56μmol/L～25.6μmol/L的Epithalon对L-02细胞增殖有促进作用。（3）运用TRAP-ELIDA检测人肝癌细胞株HepG2端粒酶活性,流式荧光原位杂交法（FLOW-FISH）检测端粒长度的变化,发现加入Epithalon后对HepG2细胞的端粒酶活性和端粒长度有一定的促进或延长作用,但这种作用并不明显。对L-02细胞而言,Epithalon能有效的提高细胞端粒酶活性,并使细胞端粒的长度得到延长。结论:研究显示特定浓度的Epithalon在体外对肿瘤细胞HepG2有一定的抑制作用,这种抑制作用可能主要表现为S期阻滞,其对HepG2细胞端粒酶和端粒长度也有一定的正向影响。与此同时,Epithalon和人胎肝细胞L-02的作用显示,Epithalon具有激活端粒酶,延长端粒、促进L-02细胞生长的作用。这提示我们,Epithalon能通过提高端粒酶活性来延长端粒,进而起到延长正常细胞乃至生物体寿命的作用。Epithalon还可能起到稳定染色体的作用,减少染色体因不稳定而引起的畸变等,进而减少这种畸变导致的癌症。衰老、癌症是多因素积累的结果,而Epithalon可能会是一种较安全的预防治疗性药物,就其抗肿瘤机制而言,Epithalon在体内可能主要是通过免疫调节途径发挥抗肿瘤作用,如果与其它抗肿瘤药物联用,有望提高抗肿瘤活性,降低毒副作用。