论文摘要
背景与目的甲状腺癌是威胁人们健康的常见头颈部恶性肿瘤,近年其发病率有上升趋势。虽然各种诊治措施不断进展,但是甲状腺癌的远期生存率仍然没有得到明显的提高,肿瘤细胞的侵袭和远处转移是其治疗失败的主要原因。肿瘤的转移是个复杂的过程,基本步骤包括肿瘤细胞侵袭、突破细胞基质,进入血液,经血流到达远处器官,突破血管进入靶器官定居、增殖。癌细胞对细胞外基质的黏附性降低是肿瘤细胞迁移、侵袭、转移的重要原因之一。研究表明:粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)作为胞内重要的信号分子,介导细胞内信号网络系统的交联,在细胞的移动和侵袭中起关键的作用。FAK在甲状腺原发癌及转移癌中均较正常甲状腺组织表达增高。因此,如果人为干预FAK的表达,有望为甲状腺癌的治疗提供一条新的途径。RNA interference(RNAi)具有很强的抑制目的基因作用,较反义寡核苷酸抑制目的基因的效果更强,RNAi被认为是继PCR后又一划时代的基因工程方法。本课题利用RNA干扰(RNA interference)沉默FAK表达研究其对甲状腺癌SW579细胞株的增殖、侵袭及转移能力的影响,为新的治疗方法提供依据。研究方法1.构建FAK RNAi慢病毒载体,对体外培养甲状腺癌SW579细胞进行感染,建立稳定转染细胞株。通过报告基因GFP检测细胞转染状态。2. MTT法检测SW579细胞沉默FAK表达前后增殖活性的变化。运用Western blot方法鉴定FAK被抑制的情况。3.制备Transwell小室,检测沉默FAK基因表达对SW579细胞侵袭及转移能力的影响。结果1.成功构建了靶向FAK的RNAi慢病毒载体,获得稳定转染SW579细胞。2.MTT检测结果:绘制生长曲线,可见干扰组细胞与未处理组及阴性对照组相比,干扰组细胞存活率明显减低(P<0.05),未处理组及阴性对照组无明显差别(P>0.05)。Western blot方法检测FAK靶向RNAi后,与未处理组及阴性质粒对照组相比,干扰组FAK的表达均明显降低。3.体外侵袭与转移实验:对比未处理组及阴性对照组细胞,干扰组细胞侵袭及转移能力明显下降(P<0.05),正常组及阴性对照组细胞之间无明显差别(P>0.05)。结论1.成功构建FAK的RNAi慢病毒载体能稳定感染甲状腺癌SW579细胞;2.FAK RNAi能有效抑制转染甲状腺癌SW579细胞增殖能力;3.沉默FAK基因表达能有效抑制甲状腺癌细胞SW579侵袭及转移能力。
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