论文摘要
建立小鼠皮肤长波紫外线（UVA）氧化损伤的动物模型和真皮成纤维细胞UVA单次氧化损伤的细胞模型,从动物整体和体外培养细胞两个层次上探讨UVA照射下玉米幼芽提取物（EMP）对小鼠皮肤氧化损伤的防护作用。动物实验设空白对照、UVA模型、EMP+UVA和VitC+UVA 4个组;透射电镜观察各组小鼠皮肤的超微结构;生化法测定小鼠皮肤组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量。细胞实验设空白对照、UVA模型、EMP+UVA和NAC+UVA 4个组;以DMEM作为基础培养基,组织块培养法和消化培养法培养真皮成纤维细胞;台盼蓝染色和MTT比色法获得UVA照射剂量―细胞活力曲线,根据曲线建立UVA氧化损伤细胞模型;HE染色和相差显微镜观察各组细胞的形态学变化;生化法测定SOD、CAT、GSH-Px酶活性和MDA含量以及细胞内GSH/GSSG比值变化;免疫细胞化学检测细胞内BCL-2蛋白水平变化和核转录因子NF-κBp65的细胞核转位;TRIZOL法从细胞中抽提总的RNA,RT-PCR半定量检测MMP-2和MMP-9的mRNA表达变化。动物实验结果如下:1566 J/cm2（共30 d）剂量的UVA照射后,小鼠表皮细胞和真皮细胞内出现空泡变性和线粒体损伤,表现出细胞凋亡特征,加EMP保护的小鼠皮肤细胞损伤程度减轻;EMP可显著提高UVA辐射小鼠皮肤组织中的SOD活性（P<0.01）和CAT活性（P<0.05）,降低MDA含量（P<0.05）,与VitC的抗氧化作用相一致。细胞实验结果如下:消化法比组织法获取细胞效率更高,适合于成纤维细胞的原代培养和传代培养;7.5 J/cm2的UVA剂量照射细胞可使细胞发生皱缩、变圆,细胞核浓缩,细胞贴壁能力下降,照射前加EMP保护的细胞有轻微的萎缩,细胞形态基本正常;EMP可显著提高UVA辐射成纤维细胞中的GSH/GSSG比值（P<0.01）,以及SOD、CAT和GSH-Px的活性（P<0.01）,降低MDA含量（P<0.01）;与UVA模型组细胞相比,EMP+UVA组细胞中BCL-2蛋白可以维持在较高的水平;UVA模型组细胞核转录因子NF-κBp65发生明显的细胞核转位,EMP+UVA组细胞转位程度降低;EMP保护细胞中MMP-2和MMP-9的mRNA表达量较UVA模型组细胞有显著的降低（P<0.01）,与NAC的抗氧化效果类似。综合以上结果,EMP能够防止UVA诱导的皮肤生物大分子的氧化损伤,维持皮肤组织细胞形态和功能的完整性;其机制可能是:EMP能够抑制细胞中ROS的生成或清除细胞中已产生的ROS,维持细胞内BCL-2蛋白水平、抗氧化酶活性和细胞氧化还原状态平衡,抑制核转录因子NF-κBp65的细胞核转位,进而抑制了细胞凋亡的发生和氧化应激相关基因（如MMP-2和MMP-9）的表达。