细支气管肺泡癌的分子生物学研究

论文摘要

研究背景细支气管肺泡癌（BAC）是肺腺癌中的一个亚型,具有单纯细支气管肺泡生长模式,而没有基质、血管或胸膜侵犯的证据。据报道,腺癌伴BAC特征和BAC局灶浸润性腺癌与单纯BAC的预后的相类似,均明显好于其他腺癌患者。近年来一些发达国家的研究资料提示,BAC的发生率呈明显上升趋势。靶向治疗是近年肿瘤学界的研究热点之一,大型研究显示,对EGFR-TKI敏感的患者倾向于为腺癌或BAC,这使得对该NSCLC亚型,特别是其与EGFR之间关系的研究兴趣有了相当程度的提高。人乳头瘤病毒（HPV）是一类嗜上皮的DNA致瘤病毒。随着分子生物学技术的发展,不断有从肺癌组织中检出HPV DNA相关序列的文献报道。但HPV感染与肺癌发生的关系,目前说法不一。目的探索BAC分子生物学特点,包括EGFR-TK结构域的突变、EGFR和HER2的基因拷贝数和蛋白表达,探讨它们与BAC的发生发展、治疗反应以及预后的关系,并探讨HPV感染在BAC发生中的作用。方法采用PCR和DNA测序法检测中国人BAC石蜡包埋组织标本EGFR基因突变情况,PCR和EGFR突变检测试剂盒检测BAC患者外周血EGFR基因突变情况,荧光原位杂交法（FISH）检测组织标本中癌细胞的EGFR和HER2基因拷贝数,免疫组织化学法（IHC）检测EGFR和HER2的蛋白表达,PCR和DNA原位杂交法（ISH）检测HPV DNA,实验数据应用SPSS14.0软件进行统计学分析。结果BAC组织标本中EGFR基因突变率50%（16/32）,其中7例（占43.8%）为外显子19上的缺失突变,1例（6.2%）为D807N,8（50%）为L858R:EGFR基因突变与性别（p=0.476）、吸烟情况（p=0.414）、病理亚型（p=0.151）和EGFR蛋白表达（p=0.231）没有显著相关性,与EGFR基因拷贝数有非常显著的相关性（p=0.001）。8例外周血EGFR检测中5例（62.5%）检测到EGFR基因突变,包括G719X 1例,L858R 1例,插入突变1例,T790M 2例。EGFR基因拷贝数增加阳性率41.2%（14/34）,与性别（p=0.681）、吸烟情况（p=0.288）和病理亚型（p=0.056）没有显著相关性。EGFR蛋白表达阳性率76.5%（26/34）,与性别（p=0.702）、吸烟情况（p=0.724）、病理亚型（p=0.842）和EGFR基因拷贝数（p=0.252）均没有显著相关性。HER2基因拷贝数增加/基因扩增阳性率5.7%（2/35）,蛋白表达阳性率6.1%（2/34）,均为相同患者,他们的EGFR基因拷贝数增加和表达亦为阳性。PCR扩增检测BAC的HPV 6/11、16、18型DNA均为阴性,ISH检测BAC的HPV16/18型DNA仅1例（1/24,4.2%）细胞核内阳性。结论BAC具有较高的对EGFR-TKI敏感性基因突变率、EGFR基因拷贝数增加的阳性率和蛋白表达阳性率,以及可能的高水平EGFR/HER2共表达,这可能间接解释了EGFR靶向药物在BAC患者中具有相对较好的治疗效果。通过外周血游离DNA中的EGFR基因突变检测有可能预测EGFR-TKI对BAC的治疗效果并监测耐药,具有良好的临床应用前景。BAC发生与HPV感染缺乏明显相关性,HPV对BAC的致癌作用有限。

论文目录

• 英文缩略语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 一、实验对象
• 二、试剂
• 三、仪器器械
• 四、实验方法
• 五、统计分析
• 结果
• 一、一般情况
• 二、EGFR基因突变
• 三、EGFR、HER2的FISH检测
• 四、EGFR和HER2 的蛋白表达
• 五、HPV DNA检测
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢