CYP450组合探针模型的建立及其应用于快速筛选中药对CYP450的诱导作用

论文摘要

目的细胞色素P450酶的活性可被许多药物诱导或抑制,导致药物自身或并用其他药物的血药浓度发生大的变化,引起临床上常见的药物相互作用。中药多用复方,存在这种相互作用的可能性更大。本课题旨在建立适合于评价中药对CYP450诱导作用的快速筛选模型,拟对常用中药逐个加以评价,希望能为中药复方配伍的合理性提供实验依据。方法采用不同动物和不同评价指标建立3种实验模型,比较其作为筛选模型的可行性与可靠性。（1）建立模型Ⅰ:大鼠在诱导前及诱导后,均同时给予6种CYP450同工酶的特异性探针药物咖啡因（CYP1A2）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、右美沙芬（CYP2D6）、氯唑沙宗（CYP2E1）和咪达唑仑（CYP3A4）,腹腔注射,采用LC-MS/MS检测不同时间点的全血中各探针药物的浓度,自身比较在诱导前和多次诱导后各种探针AUC的差别,判定药物对CYP450同工酶的诱导作用,并用模型Ⅰ评价了地塞米松对CYP450同工酶活性的诱导作用;（2）建立模型Ⅱ:小鼠经诱导数天后,同时给予6种CYP450探针药物:咖啡因、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑,腹腔注射,采用LC-MS/MS检测不同时间点的全血中各探针药物的浓度,和对照组比较,诱导组各种探针AUC的变化,判定药物对CYP450同工酶的诱导作用,并用模型Ⅱ评价了地塞米松、苯巴比妥和利福平对CYP450同工酶活性的诱导作用;（3）建立模型Ⅲ:小鼠经诱导数天后,同时给予5种CYP450探针药物:咖啡因、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬和咪达唑仑,灌胃给药,采用LC-MS/MS检测不同时间点的全血中各探针药物及其相应代谢产物（咖啡因与副黄嘌呤、甲苯磺丁脲与4-羟基甲苯磺丁脲、奥美拉唑与5-羟基奥美拉唑、右美沙芬与右啡烷、咪达唑仑与1’-羟基咪达唑仑）的浓度,和对照组比较,诱导组各种探针代谢率（产物浓度与探针原型浓度的比值）的变化,判定药物对CYP450同工酶的诱导作用,并用模型Ⅲ评价了地塞米松和苯巴比妥对CYP450同工酶活性的诱导作用;（4）运用模型Ⅲ对甘草、五味子、当归等46味临床常用中药进行快速筛选,考察这些中药对5种主要的CYP450同工酶（CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4）活性的诱导作用。结果（1）建立了同时检测大鼠全血中6种探针药物的LC-MS/MS的分析方法,方法的精密度高,回收率好,符合生物样品分析的要求,可用于组合探针药物法的研究。大鼠经地塞米松诱导后,6种探针药物的AUC与Cmax比诱导前有明显的下降,表明地塞米松对CYP1A2、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4这6种同工酶均有诱导作用。（2）建立了同时检测小鼠全血中6种探针药物的LC-MS/MS的分析方法,方法的精密度高,回收率好,符合生物样品分析的要求,可用于组合探针药物法的研究。与对照组小鼠相比,小鼠经地塞米松诱导后,6种探针药物的AUC与Cmax均明显下降,表明地塞米松对CYP1A2、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4这6种同工酶均有诱导作用;苯巴比妥对CYP1A2、2D6、3A4有诱导作用,对CYP2C9、2C19和2E1无明显作用;利福平显示出对CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4有诱导作用,对CYP2E1则无明显作用。（3）建立了同时检测小鼠全血中5种探针药物及其代谢产物的LC-MS/MS分析方法,方法灵敏、准确,专一性好,精密度高,可满足生物样品分析的要求。与对照组相比,小鼠经地塞米松诱导后,咪达唑仑的代谢率、奥美拉唑的代谢率和甲苯磺丁脲的代谢率均显著提高,提示地塞米松对CYP2C9、2C19和3A4活性有诱导作用。经苯巴比妥诱导后,咖啡因的代谢率、咪达唑仑的代谢率、奥美拉唑的代谢率和甲苯磺丁脲的代谢率均显著提高,表明苯巴比妥诱导了CYP1A2、3A4、2C19和2C9的活性。（4）从探针药物代谢率的变化来看,提示当归对CYP2C19、黄芩对CYP2C19、甘草对CYP3A4、姜黄对CYP2C19、五味子对CYP3A4、茵陈对CYP2C19、银杏叶对CYP2C9、青蒿对CYP2D6和3A4、钩藤对CYP2C9和3A4、木通对CYP2D6、杜仲对CYP2C9、2C19和3A4、柴胡对CYP2D6、2C9和3A4、白术对CYP2C9、大青叶对CYP1A2和2C9、泽泻对2C19、陈皮对CYP1A2、川乌对CYP3A4、附子对CYP2C19可能有诱导作用。其中银杏叶对CYP2C9、青蒿对CYP2D6和3A4、杜仲对CYP2C9、2C19和3A4、柴胡对CYP2D6和3A4、白术对CYP2C9、大青叶对CYP1A2的诱导作用较强。丹参、连翘、吴茱萸、葛根、白芷、川芎、防风、半夏、海藻、三七、黄连、黄芪、麻黄、麦冬、白芨、白芍、金银花、大黄、川贝、天麻、枇杷、桂枝、知母、郁金、党参、桔梗、独活和虎杖则对CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4活性无诱导作用。结论组合探针药物整体动物模型可用于快速评价化学药物或中药对CYP450同工酶活性的诱导作用,特别为中药配伍中存在的相互作用这一难题的研究提供了思路。经过研究发现许多中药能够不同程度地诱导CYP450的活性,从而加速其自身或与其合用的某些药物的代谢,降低单独使用这些药物时的疗效。此外,该研究为中药的合理使用以及中药的配伍原则提供理论依据和参考。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 CYP450 组合探针模型的建立
• 第一节 以探针药物的动力学参数为评价指标的大鼠模型Ⅰ
• 第二节 以探针药物的动力学参数为评价指标的小鼠模型Ⅱ
• 第三节 以探针药物的代谢率为评价指标的小鼠模型Ⅲ
• 第二章 快速筛选中药对CYP450 的诱导作用
• 1 仪器与试剂
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 后语
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢