论文摘要
胆囊收缩素（cholecystokinin,CCK）是一种脑肠肽,不仅存在于消化系统,在中枢和外周神经系统也有广泛分布。在中枢神经系统中,CCK主要以硫酸化的八肽胆囊收缩素（sulfated cholecystokinin octapeptide,CCK-8s）作为主要活性成份发挥其生物学效应。CCK-8s参与许多重要的生理和病理生理过程,包括行为学、焦虑、学习/记忆过程、疼痛等。CCK-8s是目前发现最强的内源性抗阿片物质,还可以降低长期应用吗啡所产生的吗啡耐受。本实验运用免疫组织化学技术和细胞内微电极记录技术,观察了福尔马林致痛后对大鼠感觉传递通路背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）和脊髓背角感觉神经元CCK免疫反应的影响,同时观察了CCK-8s对大鼠DRG神经元膜电位的作用。所得结果如下:1、福尔马林致痛对大鼠DRG神经元CCK免疫反应阳性细胞率的影响大鼠足底注射生理盐水1 h后,注射侧和非注射侧仅有少数DRG的小神经元和大、中神经元CCK免疫反应呈弱阳性。非注射侧和注射侧DRG小神经元CCK免疫反应阳性细胞率分别为24.66%±4.81%和26.21%±4.23%,大、中神经元免疫反应阳性细胞率分别为3.99%±1.75%和4.44%±1.54%,差异均无显著性。大鼠足底注射福尔马林1 h后,注射侧DRG小神经元CCK免疫反应阳性率为60.37%±6.92%,大、中神经元免疫反应阳性率为26.96%±4.01%,较同侧生理盐水1 h组均显著增加。非注射侧DRG小神经元CCK免疫反应阳性率为25.22%±5.08%,与同侧生理盐水1 h（24.66%±4.81%）相比,差异无显著性;而大、中神经元免疫反应阳性率为11.73%±2.73%,较同侧生理盐水1 h组（3.99%±1.75%）相比,差异有显著性。注射侧与非注射侧相比,大、中神经元和小神经元CCK免疫反应阳性率差异均有显著性。在大鼠足底注射福尔马林3 h后,注射福尔马林侧DRG小神经元CCK免疫反应阳性率为49.78%±3.68%,大、中神经元免疫反应阳性率为30.17%±2.87%,较注射福尔马林1 h同侧CCK免疫反应阳性率（60.37%±6.92%和26.96%±4.01%）相比,差异均无显著性。注射侧与非注射侧相比,大、中神经元和小神经元CCK免疫反应阳性率差异均有显著性。2、福尔马林致痛对大鼠DRG神经元CCK免疫反应性的影响大鼠足底注射生理盐水1 h后,注射侧和非注射侧CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值分别是0.163±0.002和0.168±0.003,差异无显著性。大鼠足底注射福尔马林1 h后,注射侧CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值是0.236±0.012,明显高于同侧生理盐水1 h组（0.163±0.002）,而非注射侧（0.173±0.002）与同侧生理盐水1 h组（0.168±0.003）相比,差异无显著性。福尔马林注射侧与同组非注射侧相比,差异有显著性。在大鼠足底注射福尔马林3 h后,注射侧DRG神经元CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值为0.209±0.006,与注射福尔马林1 h组同侧（0.236±0.012）相比差异无显著性,3 h非注射侧（0.168±0.003）与1 h的非注射侧（0.173±0.005）相比,差异也无显著性。注射侧DRG神经元CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值（0.209±0.006）较非注射侧（0.168±0.003）相比,差异有显著性。3、福尔马林致痛对大鼠脊髓神经元CCK免疫反应性的影响大鼠足底注射生理盐水后,可见极少数脊髓背角神经元呈CCK免疫反应阳性。半定量光密度均值测定,注射侧和非注射侧CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值分别是0.261±0.007和0.263±0.007,差异无显著性。大鼠足底注射福尔马林1 h后,脊髓背角神经元CCK免疫反应阳性细胞数明显增加,且注射侧阳性细胞数明显高于非注射。注射侧和非注射侧CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值分别是0.397±0.014和0.295±0.007,差异有显著性;注射侧和非注射侧明显高于同侧生理盐水1 h组（0.261±0.007和0.263±0.007）,差异均有显著性。大鼠足底注射福尔马林3 h后,脊髓背角神经元CCK免疫反应阳性细胞数明显少于注射福尔马林1 h时。注射侧和非注射侧脊髓背角CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值分别是0.366±0.009和0.303±0.005,差异有显著性。注射侧和非注射侧CCK免疫反应阳性细胞的半定量光密度均值,与注射福尔马林1 h组同侧（0.397±0.014和0.295±0.007）相比有所增减,但差异均无显著性。4、CCK-8s对DRG神经元膜电位的影响灌流CCK-8s（10-810-6 mol/L）可使部分DRG神经元（45.6%,26/57）引起浓度依赖性的去极化。此去极化可被CCK-A受体的拮抗剂prolumide（10-4 mol/L,n=8）所组断,而CCK-B受体的拮抗剂LY225910（10-4 mol/L）对CCK-8s介导的去极化没有影响。结果提示:1)由于福尔马林致痛后大鼠DRG和脊髓背角I-II层感觉神经元CCK免疫反应阳性率和半定量光密度均值均增加,表明CCK在DRG和脊髓水平参与了痛觉信息传递的调制;2)DRG神经元上可能即存在CCK-A受体,也存在CCK-B受体。激活CCK-A受体可DRG神经元去极化反应,激活CCK-B受体则不引起DRG神经元膜电位的明显改变,表明CCK-A和CCK-B受体在DRG发挥不同的生理功能;3)DRG神经元胞浆内含有CCK神经肽,而DRG神经元胞膜上存在CCK-A和CCK-B受体,有理由推测初级感觉传入末稍突触前膜可能存在突触前CCK-A和CCK-B自身受体。