中国卤虫不同发育时期的差异蛋白组学研究

论文摘要

中国卤虫（Artemia sinica）属于节肢动物门（Arthropoda）,甲壳纲（Crustacea）,鳃足亚纲（Branchiopoda）,无甲目（Anostaca）,卤虫科（Artemiidae）,卤虫属（Artemia）。主要分布于山西、西藏、新疆、青海、内蒙等内陆盐湖、盐井等高盐水体中,卤虫卵是水产育苗的优质活诱饵。近几年来,随着基因组计划的完成为生命科学研究提供了广阔的平台,但是,生命的复杂性和多样性表明,仅对遗传信息载体一基因组进行研究,还远不能对生命活动的机理做出全面的解释。因此,要对复杂的生命活动有全面的认识,必然要在蛋白质水平上对生物体进行深入的研究。卤虫蛋白质组学作为后基因组研究的重要内容之一,也逐渐成为了人们研究的热点。本研究在建立了高质量的蛋白质组学研究平台的同时,还对卤虫胚胎在不同发育组织时期的蛋白质构成进行了调查研究。本文利用蛋白组学方法,主要研究卤虫胚胎发育不同时期的蛋白质差异表达,利用双向电泳技术分离不同时期的卤虫蛋白质,并运用ImageMaster 2D Elite（Version5.0）软件对双向电泳图谱进行分析得到0h、5h、10h、15h、20h五个时期的差异蛋白斑点的分子量,等电点及蛋白相对含量,分析所得0h、5h、10h、15h、20h五个时期的差异蛋白斑点有明显的差异,0h时期的差异蛋白斑点数为18个,5h时期的蛋白斑点数为26个,10h时期的蛋白斑点数为23个,15h时期的蛋白斑点数为16个,20h时期的蛋白斑点数为14个,并呈现先上调后下调的趋势。并选取明显的10个蛋白差异斑点进行胶内酶解消化,得到的短肽片段,通过基质质谱辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDLI-TOF/MS）进行鉴定,将结果输入NCBInr数据库进行匹配、比较,推测可能的蛋白质。质谱鉴定和生物信息学分析发现这10个蛋白可大致分为热激蛋白、氧化还原酶、其他未知蛋白等四类。在蛋白质表达水平上,0h、5h、10h、15h、20h五个时期的蛋白存在显著差异,并且这些差异蛋白可能与胚胎发育有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 卤虫的生物学特征和分布
• 1.2 卤虫生物学研究进展
• 1.2.1 卤虫发育相关基因研究进展
• 1.2.2 卤虫发育相关蛋白研究进展
• 1.2.3 卤虫分子生物学研究
• 1.2.4 卤虫的经济价值
• 1.3 蛋白组学的研究
• 1.3.1 蛋白组学的研究历史
• 1.3.2 蛋白组学的研究方法
• 1.3.3 蛋白质组学的应用
• 1.4 卤虫蛋白质组学研究意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 卤虫孵化及培养条件
• 2.1.2 主要试剂及配置
• 2.2 方法
• 2.2.1 卤虫总蛋白的制备
• 2.2.2 第一向载体两性电解质等电聚焦pH 梯度等电聚焦电泳
• 2.2.3 第二向 SDS-PAGE 凝胶电泳
• 2.2.4 蛋白染色检测
• 2.2.5 凝胶图像的采集与数据分析
• 2.2.6 质谱检测
• 3. 结果
• 3.1 蛋白标准曲线绘制
• 3.2 卤虫总蛋白的电泳结果
• 3.3 卤虫蛋白双向电泳图谱及软件分析
• 3.4 蛋白斑点检测结果分析
• 4. 讨论
• 4.1 中国卤虫不同发育时期的总蛋白 SDS 凝胶电泳差异条带分析
• 4.2 双向电泳差异蛋白斑点图谱分析
• 4.3 中国卤虫差异蛋白斑点质谱鉴定
• 4.4 实验条件优化
• 4.4.1 总蛋白提取条件的优化
• 4.4.2 影响卤虫样品双向电泳质量的关键因素条件优化
• 5. 结论
• 5.1 建立了高质量的卤虫蛋白质组学的研究平台体系
• 5.2 卤虫胚胎组织双向电泳研究分析
• 5.3 利用 MALDI-TOF-MS 技术对卤虫差异蛋白的功能分析
• 参考文献
• 致谢