论文摘要
【目的】云南肺癌患者HLA-A，B，DRB1，DQB1等位基因中以HLA-A*02出现的频率尤高（90％），资料显示HLA-A2分子可递呈野生型P53264-272肽段，而研究发现一种可溶性的单链T淋巴细胞受体（single-chain T cell receptor，scTCR）可特异性的识别P53264-272／HLA-A2复合物，该TCR的多聚体（264scTCR／multimer）尤其是它的四聚体高度保持识别特异性且其亲和力最强。本研究应用TCR多聚体（264scTCR／multimer）特异性识别转染HLA-A*0201基因之靶细胞—宣威肺腺癌细胞株（XWLC-05）表面P53264-272／HLA-A2复合物，探查XWLC-05中HLA特异性分子限制的抗原肽，选取并明确相应受体的T细胞克隆，提高特异性T淋巴细胞的杀伤能力，为P53基因个体化治疗和进一步完善肺癌早期预防奠定基础。【方法】选取经序列特异性引物扩增法（PCR-SSP）测定HLA-A*0201表达阴性的宣威肺腺癌细胞株XWLC-05为实验用细胞，应用构建的HLA-A*0201基因真核质粒表达载体转染HLA-A*0201基因于宣威肺腺癌细胞株XWLC-05中进行表达。经测定表达阳性后进行TCR的多聚体（264scTCR／multimer）对转染细胞的识别测定。【结果】HLA-A*0201基因转染宣威肺腺癌细胞株XWLC-05后，经G418筛选获得稳定表达的阳性克隆，与外源野生型P53264-272肽断和人β2微球蛋白共同孵育。经TCR的多聚体（264scTCR／multimer）染色后，流式细胞术（FCM）测定表达识别为阳性结果。【结论】HLA-A*02基因与云南肺癌高频发病相关；HLA-A*0201基因转入云南宣威肺腺癌细胞株XWLC-05中可高效表达并递呈野生型P53264-272肽段，被TCR的多聚体（264scTCR／multimer）所识别，为进一步提高特异性T淋巴细胞的杀瘤效应及P53基因个体化治疗奠定了必备基础。