甲醛和过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的毒性作用

论文摘要

甲醛是公认的环境致癌物,自从Rapoporty1946年首次报道了甲醛具有致突变作用以来,人们对甲醛的致癌性、致突变性做了大量研究。至今,绝大多数研究都集中在外源性甲醛即环境污染物。近年来有学者提出内源性甲醛可能是启动内皮细胞损伤,导致动脉硬化的潜在危险因素之一。人体内血液、尿液及组织中存在的少量甲胺,可以通过氧化脱氨产生内源性甲醛和等摩尔的过氧化氢（H2O2）。本研究以人脐静脉内皮细胞株CRL-2480为研究对象,采用彗星电泳法和K-SDS法检测甲醛、H2O2、等摩尔甲醛和H2O2对血管内皮细胞DNA的损伤作用,并采用高效液相色谱法初步检测该细胞株是否存在氨基脲敏感胺氧化酶（SSAO）活性。主要研究内容和方法:一、取人脐静脉内皮细胞与不同浓度（0、5、10、25、50、100μmol/L）甲醛、H2O2、甲醛和H2O2共同孵育20min,或与25μmol/L,甲醛、H2O2、甲醛和H2O2孵育不同时间（0、10、20、30min）后,采用彗星电泳法检测DNA断裂损伤,荧光显微镜下观察、照相,对彗星尾距进行测量和分析。二、取人脐静脉内皮细胞与不同浓度（0、10、50、100、500、1000、2000μmol/L）甲醛、甲醛和H2O2孵育1.5h或50μmol/L、100μmol/L浓度甲醛、甲醛和H2O2孵育不同时间（0、0.5、1、1.5、2、4h）,用改良K-SDS沉淀法测定各组细胞DNA一蛋白质交联（DPC）率。三、 取人脐静脉内皮细胞,PBS液洗涤,细胞铲刮离细胞收集离心,超声破碎细胞。最后一次的PBS洗涤液、离心液上清、细胞悬液分别与苯甲胺37℃孵育1h,与衍生化试剂45℃作用15min后,乙酸乙酯萃取2次,收集上清N2气吹干,残渣溶解过滤,用高效液相色谱法检测SSAO活性。研究结果:一、 浓度为0、5、1O、25、50、100μmol/L甲醛作用20min,彗星尾距（x|-±s）分别为0.032±0.018、0.272±0.229、0.328±0.278、0.343±0.309、0.035±0.051、0.037±0.076,5～25μmol/L,甲醛引起彗星尾距增大（P<0.05）:浓度为0、5、10、25、50、100μmol/LH2O2作用20min,彗星尾距（X|-±s）分别为0.032±0.018、4.83

论文目录

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• 第一部分: 绪论
• 2O₂对人脐静脉内皮细胞DNA的损伤'>第二部分: 彗星电泳法检测甲醛和H₂O₂对人脐静脉内皮细胞DNA的损伤
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 2O₂引起人脐静脉内皮细胞DNA-蛋白质交联'>第三部分: K-SDS法检测甲醛和H₂O₂引起人脐静脉内皮细胞DNA-蛋白质交联
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 第四部分: 高效液相色谱法检测人脐静脉内皮细胞SSAO活性
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 综述: 细胞培养在毒理学研究中的应用
• 致谢