柑橘绿霉病生防细菌多粘类芽孢杆菌Y25的初步研究

论文摘要

如今人们在健康和环保上的意识不断加强,对化学杀菌剂造成的一系列问题也日益重视,寻找一种环保的替代化学杀菌剂来防治水果腐烂的方法日益迫切。于是生物防治作为一种符合可持续发展概念的新兴技术,引起了许多科研工作者的关注。本课题研究表明,菌株Y25对指状青霉(Penicillium digitatum)具有明显的抑制作用,在柑橘绿霉病防治等方面显示了良好的应用前景。主要研究结果如下：1.从柑橘树根系土壤里分离得到一株对柑橘绿霉病具有拮抗作用的细菌,经过形态学特征观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列同源性分析,证实该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),命名为菌株Y25。2.利用三种不同培养基(LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基和YEPD培养基)培养所筛选到的多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) Y25,研究其发酵液活性物质对指状青霉的抑制作用。结果表明,菌株Y25利用LB培养基的抑菌效果最好。通过均匀设计试验对该培养基配方及培养条件进行优化,得到最佳的发酵培养基配方为：酵母粉5.7g/L,蛋白胨10.8g/L, NaC14.8g/L。最佳的发酵条件为：发酵时间48h,接种量1%,发酵温度32℃,装液量50mL/250mL,初始pH 7.5,转速180r/min。3.采用平板对峙法和牛津杯法,分别对6种植物病原真菌和5种细菌进行了活性物质的抑菌试验。结果显示,对其中3种植物病原真菌(尖孢镰刀菌、立枯丝核菌和白地霉)和2种细菌(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)均具有抑菌效果,说明菌株Y25抗菌谱具有一定的广谱性。4.初步研究了菌株Y25发酵液对指状青霉生长发育的影响。结果表明,菌株Y25发酵液可以有效抑制青霉孢子的萌发；与对照组比较,其菌丝出现消融、断裂,扭曲变形现象。说明菌株Y25发酵液对绿霉病菌菌丝生长和孢子萌发具有较好的抑制作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 柑橘现状分析
• 2 柑橘采后腐烂及保鲜概况
• 3 柑橘采摘后病害的防治
• 3.1 化学防治和物理防治
• 3.1.1 化学防治
• 3.1.2 物理防治
• 3.2 生物防治
• 4 多粘类芽孢杆菌的研究进展
• 5 本论文的研究内容与技术路线
• 5.1 主要内容
• 5.1.1 柑橘绿霉病生防菌的分离筛选和鉴定
• 5.1.2 柑橘绿霉病生防菌发酵条件的优化
• 5.1.3 柑橘绿霉病生防菌理化性质的初步研究
• 5.1.4 柑橘绿霉病生防菌抗菌特性初步研究
• 5.2 技术路线
• 第二章 柑橘绿霉病生防菌的分离筛选和鉴定
• 1 材料
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 主要试剂及仪器
• 2 方法
• 2.1 菌株的分离纯化
• 2.2 初筛
• 2.3 复筛
• 2.4 生防菌株的鉴定
• 2.4.1 形态特征
• 2.4.2 生理生化特征
• 2.4.3 16S rDNA序列分析
• 3 结果与分析
• 3.1 生防菌株的分离纯化
• 3.2 生防菌株的复筛
• 3.3 遗传稳定性检测
• 3.4 形态学特征分析
• 3.5 生理生化特征
• 3.6 16S rDNA序列分析及系统发育学分析
• 3.6.1 基因组DNA提取及PCR片段扩增
• 3.6.2 序列分析
• 3.6.3 菌株Y25系统进化树的构建
• 4 小结与讨论
• 第三章 柑橘绿霉病生防菌摇瓶发酵工艺优化
• 1 材料
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 菌株Y25培养基的选择
• 2.2 不同时间对发酵液抑菌效果的影响
• 2.3 不同接种量对发酵液抑菌效果的影响
• 2.4 不同温度对发酵液抑菌效果的影响
• 2.5 不同装液量对发酵液抑菌效果的影响
• 2.6 不同初始pH对发酵液抑菌效果的影响
• 2.7 不同转速对发酵液抑菌效果的影响
• 2.8 培养基配方优化设计
• 2.9 菌株Y25生长曲线的制定
• 3 结果与分析
• 3.1 菌株Y25培养基的选择
• 3.2 不同时间对发酵液抑菌效果的影响
• 3.3 不同接种量对发酵液抑菌效果的影响
• 3.4 不同温度对发酵液抑菌效果的影响
• 3.5 不同装液量对发酵液抑菌效果的影响
• 3.6 不同初始pH对发酵液抑菌效果的影响
• 3.7 不同转速对发酵液抑菌效果的影响
• 3.8 最佳培养基配方的优化
• 3.9 优化前后菌株Y25的生长曲线
• 4 小结与讨论
• 第四章 柑橘绿霉病生防菌理化性质的初步研究
• 1 材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 抗菌物质粗提液稳定性研究
• 2.1.1 物理稳定性
• 2.1.2 化学稳定性
• 2.2 保存时间对抑菌活性的影响
• 2.2.1 生防菌发酵液
• 2.2.2 生防菌无菌上清液
• 3 结果与分析
• 3.1 发酵液粗提液稳定性研究
• 3.1.1 物理稳定性
• 3.1.2 化学稳定性
• 3.2 保存时间对抑菌活性的影响
• 3.2.1 生防菌发酵液
• 3.2.2 生防菌无菌上清液
• 4 小结与讨论
• 第五章 柑橘绿霉病生防菌抗菌特性的初步研究
• 1 材料
• 1.1 供试菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 柑橘绿霉病生防菌广谱抗菌性的研究
• 2.1.1 植物病原真菌的准备
• 2.1.2 菌株Y25发酵液的准备
• 2.1.3 供试细菌培养液的准备
• 2.1.4 抗菌性测定
• 2.2 柑橘绿霉病拮抗机理的初步研究
• 2.2.1 实验准备
• 2.2.2 实验步骤
• 3 结果与分析
• 3.1 菌株Y25抗菌特性分析
• 3.1.1 菌株Y25对细菌的拮抗性
• 3.1.2 菌株Y25对植物病原真菌的拮抗性
• 3.2 拮抗机理的初步研究
• 3.2.1 菌株Y25发酵液对指状青霉孢子萌发的影响
• 3.2.2 菌株Y25发酵液对指状青霉菌丝生长的影响
• 4 小结和讨论
• 第六章 总结与展望
• 1 总结
• 2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录