汉防己甲素和吉西他滨协同使用对化疗耐药胰腺癌细胞的凋亡诱导作用

论文摘要

胰腺癌是消化系统常见恶性肿瘤之一,早期不易发现,确诊时通常已属晚期。目前85%的胰腺癌病人在确诊后1年内死亡,5年生存率不足5%。大多数患者就诊时因已经侵袭或转移到胰外器官而无法切除,手术切除率仅20%左右。目前,胰腺癌的辅助治疗效果令人失望,其治疗仍以化疗为主,但大多数药物疗效欠佳、副作用较大,疗效相对较好的化疗药物其反应率仅25%,临床应用吉西他滨的化疗有效率仅为28%,且联合化疗并不能提高疗效。多药耐药（Multi-drug resistance, MDR）的产生是导致胰腺癌化疗失败的主要原因。研究表明,中药汉防己提取的生物碱汉防己甲素对胰腺癌有明显的抑制作用。本研究进一步阐明汉防己甲素对胰腺癌耐药和凋亡抗性影响的机理,加深了解汉防己甲素对耐药细胞凋亡调控,为今后开辟汉防己甲素逆转耐药研究提供新手段。目的：研究汉防己甲素对胰腺癌化疗耐药产生与凋亡的影响。方法：分对照组（只加培养基）、吉西他滨组（Gemcitabine组）和汉防己甲素联合吉西他滨组（Tet/Gem组）,后2组采用不同浓度汉防己甲素和吉西他滨作用于人胰腺癌敏感株SW1990和吉西他滨耐药株SW1990/Gem细胞,通过MTT法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用,碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡。结果：SW1990/Gem耐药胰腺癌细胞株耐药指数（RF）为4.70,汉防己甲素作用耐药胰腺癌细胞后其RF降至1.69,证明汉防己甲素可逆转SW1990/Gem耐药胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。化疗耐药胰腺癌细胞凋亡在12h、18h、24h,Tet/GEM组与GEM组、对照组比较,差异有非常显著性意义（P＜0.01）结论：中西药的联合应用,明显改善了胰腺癌的临床缓解与生存期。补益中药以及活血化瘀中药的增敏作用在临床与实验研究中已经得到了充分的证实,但其确切的作用机理尚无进一步确定。汉防己甲素是从防己科千金藤属植物粉防己的块根中分离的主要生物碱,其化学结构属双苄基异喹啉类,通过膜转运及在细胞内的分布利用。汉防已甲素对胰腺癌、食道癌及乳腺癌等实体瘤与白血病均有一定直接抑制作用。汉防己甲素是一种有效的放射增敏剂,通过改善癌细胞的乏氧状态而起增敏作用。天然药物汉防己甲素除具备通过增加肿瘤细胞内化疗药物浓度逆转胰腺癌SW1990/Gem细胞株多药耐药性,达到促进化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的作用之外,还可以抑制肿瘤细胞增殖并具有促进其凋亡作用,提示临床上肿瘤晚期患者可采用抗肿瘤药物联合应用天然有效成分以提高治疗效果。本研究表明,经汉防己甲素作用后的耐药株胰腺癌细胞其RF由处理前的4.70降至1.69,说明汉防己甲素可以逆转SW1990/Gem耐药胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药,其作用途径可能与下调化疗耐药胰腺癌细胞MRP蛋白表达有关。同时,吉西他滨直接激活MRP基因启动子使转录水平的MRP基因表达增强,汉防己甲素有协同吉西他滨增强对化疗耐药胰腺癌细胞凋亡作用。因此进一步深入阐述胰腺癌细胞抗凋亡的多重机制,寻找和重建胰腺癌细胞敏感的凋亡通路与逆转抗凋亡状态,对于彻底克服胰腺癌原发性耐药具有重要的意义。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、汉防己甲素和吉西他滨协同使用对化疗耐药胰腺癌细胞的凋亡诱导作用
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 试剂
• 1.1.2 仪器
• 1.1.3 细胞株
• 1.1.4 试验主要试剂的配制
• 1.1.5 细胞培养与分组
• 1.1.6 MTT法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用
• 1.1.7 碘化丙啶染色检测细胞凋亡
• 1.1.8 统计学方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 化疗敏感和耐药胰腺癌细胞对抗肿瘤药物敏感性
• 1.2.2 对化疗耐药胰腺癌细胞凋亡作用
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 胰腺癌化疗进展
• 综述参考文献
• 致谢