论文摘要
大青龙汤出自张仲景《伤寒论》，为一峻汗方，由麻黄、桂枝、炙甘草、苦杏仁、生姜、大枣、石膏七味药组成。传统中医治则用于外寒里热，表里俱实。症见脉浮紧、无汗、身热、咳嗽、咽痛、烦躁等。但若见脉弱，汗出，恶风者为其禁忌。现代临床主治呼吸系统疾患，如感冒、支气管炎、哮喘等。亦用于治疗鼻出血、汗腺闭塞征、风湿性关节炎者，等。大青龙汤历经两千余年的临床实践，疗效显著，沿用至今，经久不衰。2009年全球爆发新甲型H1N1流感时，东莞市为我国重点疫区，东莞市沙田医院采用大青龙汤剂治疗甲型流感患者，疗效明显，尤以退热效果显著。本论文在前期临床药效基础上，对大青龙汤解热及抗甲型H1N1流感病毒进行了较系统研究，旨在诠释大青龙汤解热及抗甲型流感病毒的药效物质基础，为该经典方剂的临床疗效提供科学依据。本文系统查阅了大青龙汤及国内外关于中药抗流感病毒与解热的研究文献，对该经典方剂的证论方解、处方药味化学成分及药理作用和临床应用，以及中药解热和抗流感病毒作用研究概况进行了较系统综述，为本论文课题设计提供了参考依据。本研究将大青龙汤视为整体，采用超临界CO2萃取法及系统溶剂法将其分成不同的化学物质部位,即超临界CO2萃取物（主要为挥发油）、总多糖、生物碱、酚酸、苷类、萃余水相及石膏水煎液。药理筛选实验研究表明，大青龙汤的超临界CO2萃取物和苷类成分具有明显抗甲型H1N1流感病毒活性；大青龙汤生物碱、总多糖及石膏有明显的解热作用。采用气质联用（GC-MS）技术对抗流感病毒有效物质部位桂枝-生姜超临界CO2萃取物进行分析，共鉴定55种化合物，相对含量占总成分的97.29%。其成分主要为醛、酮、酯类化合物。其中桂枝的主要有效成分桂皮醛相对含量为62.85%，2-甲氧基肉桂醛为16.03%；生姜中的（+）-香橙烯为2.34%，6-姜酚为0.37%，α-姜烯为0.14%；采用液质联用（HPLC-MS）技术对抗流感病毒有效物质部位正丁醇萃取物的成分进行分析，鉴定了35个化合物中的22个，如苦杏仁苷（Amygdalin）、芦丁（Rutin）、甘草苷（Liquiritin）及甘草酸单铵盐（Glycyrrhizic acidammonium salt）等。其中化合物多源于甘草，且以苷类为主，苷元结构复杂，包括黄酮类，萜类等，从而阐释了大青龙汤抗流感病毒的物质背景。本文对大青龙汤有效物质部位组方的抗流感病毒药效及其作用机理进行了研究。以甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株（FM/1/47株）滴鼻感染Babl/c小鼠，以大青龙汤抗流感病毒有效物质部位组方，与大青龙汤剂进行抗流感病毒的药效比较研究，并探讨其作用机理。药效学研究包括供试药物对流感病毒致小鼠死亡的保护实验，药物对流感病毒感染小鼠病毒性肺炎的影响。评价指标有死亡保护率、脾指数、胸腺指数、肺指数、肺病变抑制率、肺组织病理结构变化等。抗流感病毒作用机理主要研究药物对流感病毒感染小鼠血清及肺组织中免疫因子的影响，评价指标包括炎症因子，即肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）；抗病毒因子，即γ-干扰素（IFN-γ）；抗炎因子，即白细胞介素-10（IL-10）等。结果表明，大青龙汤及其抗流感病毒有效物质部位组方均可明显延长流感病毒感染小鼠的生存时间，明显抑制感染小鼠病毒性肺炎。但有降低免疫器官脾与胸腺的重量及脏器指数的作用，提示大青龙汤对于免疫器官可能存在抑制作用，临床使用避免过量，中病即止；抗流感病毒有效物质部位组方抗流感病毒作用不及大青龙汤，但降低免疫器官重量的作用强于汤剂。小鼠被流感病毒感染后，血清中的TNF-α、IFN-γ、IL-10明显降低，IL-6明显升高；肺组织中的TNF-α、IFN-γ和IL-6明显升高，IL-10明显降低。显示小鼠被流感病毒感染后免疫系统出现严重紊乱，具体表现为全身免疫抑制，局部病变组织即肺部免疫过度。与病毒组比较，大青龙汤抗流感病毒有效物质部位组方对小鼠血清中的TNF-α、IFN-γ及IL-10有升高作用，对IL-6有降低作用，以纠正炎症因子在全身的过度表达，从而降低全身的炎症反应；对小鼠肺中的TNF-α、IFN-γ有降低作用，对IL-6有轻微升高作用，对IL-10有轻微降低作用或可能是双向调节作用。大青龙汤抗流感病毒有效物质部位组方对TNF-α、IFN-γ影响较大，对IL-6、IL-10影响较小，并有双向调节现象。说明大青龙汤可以增强全身免疫，同时又能抑制病变肺脏的过度免疫，全面协调免疫机制使其达到平衡，从而激发机体发挥抗流感病毒作用。依据结果推测，大青龙汤抗流感病毒有效物质可能在病毒感染的起始阶段，即可促使机体产生干扰素，发挥抗流感病毒作用，是否还通过其他途径发挥抗流感病毒作用，有待进一步研究。采用大鼠腹腔注射脂多糖制备发热模型，将大青龙汤解热有效物质部位组方，与大青龙汤剂的解热效果进行比较研究，并探讨其解热的作用机理。结果表明，解热有效物质部位组方解热效果不如原方汤剂。给药组大鼠在致热2小时后，其血清中TNF-α、IL-1β明显降低；各给药组大鼠在致热4小时后，其下丘脑中cAMP明显降低；各给药组大鼠在致热4小时后，组方低剂量组及石膏高、低剂量组下丘脑中钙离子明显升高，组方高剂量组与全方组也有升高趋势，但无显著性差异。大青龙汤及其解热有效物质部位组方解热机理为降低外周致热因子TNF-α、IL-1β，降低下丘脑中cAMP，升高下丘脑中钙离子。将大青龙汤抗流感病毒与解热两个有效物质部位群进行联合组方，分别探讨联合组方与抗流感病毒有效物质部位组方的抗流感病毒作用、联合组方与解热有效物质部位组方的解热作用。结果表明，联合组方表现出较好的抗流感病毒及解热作用，均优于各药效物质部位组方的效果，说明大青龙汤抗流感病毒作用是抗流感病毒与解热两个有效物质部位群的协同起效所致；抗流感病毒有效物质部位可以增强解热有效物质部位的解热作用，表现出两个药效物质部位的协同作用。研究表明，大青龙汤抗流感病毒有效物质部位与解热有效物质部位可以协同增效。该研究为组分中药的研究积累了有益经验，为阐释中药复方的配伍协同作用理论提供了现代科学实践依据。