重组BMP7腺病毒治疗椎间盘退变的实验研究

论文题目: 重组BMP7腺病毒治疗椎间盘退变的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 骨科学

作者: 刘巍

导师: 唐天驷

关键词: 腺病毒,骨形成蛋白,蛋白多糖,型胶原

文献来源: 苏州大学

发表年度: 2005

论文摘要: 下腰痛发病率较高，并造成巨大的社会经济损失，大约有75％到80％的人一生中发生过下腰痛，椎间盘退变(DDD)是其主要原因。现在的治疗方法有保守治疗和手术治疗，主要针对的是患者的临床症状，而不是针对疾病的病理过程。随着分子生物学的进步，使在细胞水平治疗DDD成为可能。 DDD的病因学和病理生理学尚不十分清楚。已知正常髓核中富含蛋白多糖和Ⅱ型胶原，纤维环富含Ⅰ型胶原，早期DDD由髓核中蛋白多糖减少引起。在生物化学水平，蛋白多糖减少反应了髓核细胞合成和分解代谢的失衡，随着基质中蛋白多糖减少，髓核脱水、高度降低使椎间盘载荷能力下降，从而影响脊柱的生物力学性能。虽然DDD包含了很多生物化学和生物力学因素，但通过治疗来增加蛋白多糖含量，从而增加其含水量及生物力学性能是有潜在治疗效果的。1991年Thompson等发现胰岛素样生长因子(IGF-1)、表皮样生长因子(EGF)、转化生长因子-β(TGF-β1)能使体外培养的犬椎间盘细胞增加蛋白多糖的合成，并提出用生长因子治疗DDD。本实验将原核表达载体pBlue-BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切，重组了BMP7的腺病毒载体(Ad-BMP7)，并转染293细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Ad-BMP7经限制性内切酶PI-Sce I和I-Ceu I双酶切获得BMP7基因片段，PCR扩增得到特异的扩增片段，表明重组的Ad-BMP7载体构建成功，其中携带有目的基因BMP7cDNA片段。载体构建成功后，进行人退变髓核细胞的原代培养，并了解其生物学特性，用台盼蓝排斥试验进行细胞活力测定。发现人退变髓核细胞贴壁及生长的速度均十分缓慢，首次培养期间，髓核细胞活力可达100％，传1代后细胞活力为80～90％。将腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)转染至髓核细胞内，24小时后即有绿色荧光发出，持续时间可达4周。当MOI值为150时，转染阳性率达100％，说明人退变髓核细胞可长期表达外源性基因。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分重组BMP7腺病毒载体的构建

第二部分人退变髓核细胞的原代培养

第三部分重组BMP7腺病毒转染人退变髓核细胞的表达及其对细胞生物学行为的影响

第四部分重组BMP7腺病毒转染兔髓核组织的表达及对其生物学行为的影响

结论

综述椎间盘退变的基因治疗

缩略词

致谢

发布时间: 2006-11-10

参考文献

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重组BMP7腺病毒治疗椎间盘退变的实验研究

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