论文摘要
本研究应用丙戊酸（VPA）在体外培养的SH-SY5Y细胞中建立研究VPA神经保护作用机制的实验模型,并进一步研究这种细胞模型的蛋白质组学改变,筛选出与VPA作用机制相关的蛋白质,这些研究结果为进一步探索VPA的神经保护作用机制和以后VPA在临床治疗中应用的拓宽提供了有价值的新线索和理论依据。本研究对构建的VPA神经细胞保护模型通过MTT比色法检测细胞活性及代谢状态、AO-EB染色法检测细胞凋亡和死亡率。采用二维差异凝胶电泳（2D-DIGE）和基质-辅助激光解析/电离-飞行时间质谱（MALDI-ToF MS）技术分析经VPA保护后SH-SY5Y细胞的蛋白质组学改变。在VPA处理24小时的SH-SY5Y细胞中鉴定出3个差异表达蛋白：其中真核翻译起始因子4A亚基1蛋白（eIF4A1）和三磷酸腺苷6V亚基1B2亚单位蛋白（ATP6V1B2 protein）表达下调,而核内不均一性核糖核蛋白K（hnRNP K）表达上调。我们还选择质谱鉴定的eIF4A1蛋白进行了2D-Western Blot验证,从质谱学和免疫学两个不同的角度确定蛋白点1为eIF4A1蛋白。这三种蛋白在功能上均与细胞内的氧化应激有一定关系。这些结果表明抗氧化应激可能是YPA产生细胞保护机制的一个途径。就我们所知,这三个蛋白质在VPA对SH-SY5Y细胞产生保护作用的蛋白质组学研究中是首次发现,而且eIF4A1以及ATP6V1B2在SH-SY5Y细胞的研究中更是第一次报道。生物信息学分析表明这些蛋白的发现为阐明VPA的神经细胞保护作用机制并为其作为神经保护性药物在临床应用提供了新的线索和理论依据。
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