论文摘要
背景和目的：大肠癌是最为常见的恶性肿瘤之一。目前对于晚期大肠癌或术后复发转移的病例，尚无有效的治疗手段。研发大肠癌高效的肿瘤疫苗，是目前的研究热点之一，现也已被视为未来提高其临床治愈率的希望所在。本课题结合表位生物学进展和临床病理学基础，提出针对大肠癌的新型CEA疫苗设计方案：以CEA HLA-A2限制性CTL表位与PADRE（非天然通用Th表位）作为CEA疫苗的融合治疗表位，以人类乳头状病毒16型晚期结构蛋白（HPV16 L1）作为CEA疫苗的蛋白载体，并以安全、高效的真核细胞表达体系——Bac to Bac杆状病毒表达系统来表达重组蛋白。在疫苗的设计上，兼顾了安全性和高效性，综合利用各组分的免疫特性，使之可能发挥协同作用，有利于打破机体对CEA的免疫耐受，激发高效、持久的CTL反应，从而为大肠癌的治疗探索新的方法。 方法：1、根据HPV16L1基因图谱和其蛋白形成病毒性颗粒的结构特性，设计含有限制性内切酶Sal Ⅰ和Not Ⅰ位点的引物，选择性从质粒114KL1p FastBac1扩增HPV16△L1片段（去除编码其C末端34个氨基酸残基的序列），并将其连入T载体。2、采取定向克隆的方法，将HPV16△L1片段克隆到空载体pFastBac1的Sal Ⅰ和Not Ⅰ位点，构建中间质粒HPV16△L1pFastBac1，并测序验证。3、设计、合成含有限制性内切酶Not Ⅰ和Xba Ⅰ位点的编码CEA HLA-A2限制性CTL表位和通用性Th表位PADRE的可退火引物，将其克隆至中间质粒HPV16△L1pFastBac1的相应酶切位点，构建新型CEA疫苗的重组杆状病毒转移质粒，测序并酶切鉴定。4、用重组杆状病毒转移质粒转化感受态菌株DH10Bac，通过转座效应得到融合表位疫苗的重组杆状病毒表达载体。5、用脂质体介导转染Sf9细胞，并通过PCR鉴定重组杆状病毒。6、采用免疫组化染色检测45例大肠癌中HPV16壳蛋白抗原（HPV16 L1）、P53、PCNA的表达。 结果：1、对克隆的HPV16△L1片段的PCR扩增产物进行电泳，在1.6kb附近见到一特异性条带，表明HPV16△L1片段克隆成功。2、重组杆状病毒转移质粒经Sa1Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后，得到目的片段和载体片段，测序结果符合设计序列，表明连接成功。3、提取感染重组杆状病毒的Sf9细胞DNA后，PCR证实其产物为所需序列。
论文目录
相关论文文献
- [1].血清CA125、CA199与CEA联合检测对胆囊癌的诊断价值分析[J]. 现代消化及介入诊疗 2019(12)
- [2].CA199、CA125、CEA联合应用在炎症性肠病早期筛查中的价值研究[J]. 河北医药 2020(09)
- [3].血清CEA联合CA19-9在胃间质瘤中的辅助诊断价值[J]. 河南医学研究 2020(14)
- [4].一例腺性膀胱炎癌变患者血清CEA、CA19-9水平变化及其意义分析[J]. 河南医学研究 2020(20)
- [5].脂联素及CEA、CA125、CA199水平在胃癌患者的变化及其临床意义[J]. 航空航天医学杂志 2020(09)
- [6].CEA与CA19-9在结直肠癌中的表达及病理参数和预后关系探讨[J]. 中国农村卫生 2016(23)
- [7].血清CEA、CA199水平在胆道恶性肿瘤早期诊断中的价值[J]. 中外医学研究 2016(35)
- [8].血清CEA、CA199作为晚期胃癌疗效评价指标的临床价值[J]. 南通大学学报(医学版) 2016(06)
- [9].血管内皮生长因子(VEGF)和血清癌胚抗原(CEA)在直肠癌中的表达及其临床意义[J]. 实用癌症杂志 2016(11)
- [10].变应性支气管肺曲霉菌病治疗效果中血清CEA的评估分析[J]. 中国现代药物应用 2017(14)
- [11].CA19-9和CEA在肝胆管结石合并胆管癌诊断与预防评估中的价值[J]. 肝脏 2015(11)
- [12].健脾抗癌方抗晚期胃癌化疗毒副反应及对CEA的影响[J]. 中医药临床杂志 2015(09)
- [13].血清CEA在评估变应性支气管肺曲霉菌病治疗疗效中的临床意义[J]. 环球中医药 2015(S1)
- [14].联合检测CEA、CA199在消化系统恶性肿瘤中的意义[J]. 世界最新医学信息文摘 2016(07)
- [15].腮腺肿瘤患者唾液和血液中CEA、CA125含量的检测及其在肿瘤组织中的表达[J]. 北京口腔医学 2014(06)
- [16].血清CEA水平与厄洛替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效的相关性分析[J]. 现代肿瘤医学 2015(06)
- [17].胆汁中CEA和CA199水平对诊断胆囊癌的临床意义[J]. 黑龙江医药科学 2015(01)
- [18].CEA和CA19-9在结直肠癌中的表达及病理参数和预后关系探讨[J]. 世界最新医学信息文摘 2015(22)
- [19].深部热疗后肺癌标志物CEA变化对预后的意义[J]. 当代医学 2015(23)
- [20].大连市中心医院防治颈动脉粥样硬化性狭窄硕果累累 陈东:推广CEA技术正当时[J]. 东北之窗 2017(08)
- [21].检测血清CEA及CA199水平在腹部肿瘤诊断中的应用价值[J]. 中国社区医师 2020(29)
- [22].Ⅰ期、Ⅱ期胰腺导管腺癌根治术后血清CA125、CEA、CA19-9及预后分析[J]. 浙江创伤外科 2020(05)
- [23].术前CEA、D-二聚体、纤维蛋白原与结直肠癌临床病理特点、分期及预后相关性研究[J]. 临床医药文献电子杂志 2019(82)
- [24].炎症性肠病与直肠癌患者血清中CA199、CA125、CEA水平表达差异及临床意义[J]. 川北医学院学报 2019(06)
- [25].血清CA125、CEA检测在非小细胞肺癌诊断中的应用价值分析[J]. 现代诊断与治疗 2020(18)
- [26].血清CEA水平与结直肠癌发生部位的关系[J]. 南通大学学报(医学版) 2016(05)
- [27].超声联合CA19-9及CEA检测对胆囊癌早期诊断准确性的影响[J]. 中国中西医结合外科杂志 2017(03)
- [28].血清CEA、CA19-9检测在胃癌术后监测复发转移中的价值[J]. 交通医学 2017(04)
- [29].CEA和CA19-9在结直肠癌患者中的诊断及预后价值[J]. 中国现代普通外科进展 2017(07)
- [30].血清CA199和CEA联合检测对胆管癌的诊断价值分析[J]. 临床医药文献电子杂志 2016(03)