论文摘要
背景与目的宫颈癌（cervical cancer）是全球女性中仅次于乳腺癌的最常见的恶性妇科肿瘤。患者高发年龄呈双峰状，35～39岁和60～64岁。据国际癌症中心估计，每年新发病例约37万，占所有肿瘤的9.8％，且年轻患者有上升趋势。宫颈癌有较长的癌前病变阶段，其病因尚未完全明了，国内外资料认为其发病与过早性生活、性生活紊乱、早年分娩、密产多产、HPV感染、经济状况等有关。肿瘤血管生成（tumor angiogenesis）理论认为肿瘤的生长和转移依赖于肿瘤血管生成，肿瘤细胞代谢产生的化学信号可激活处于休眠状态的血管内皮细胞从而促进肿瘤血管生成。实体肿瘤在没有新生血管形成以前肿瘤只能够长到1～3mm，不会发生转移，在新生血管形成以后肿瘤会呈指数倍增长，转移的机会随之增加。而以直接蔓延作为主要转移途径的宫颈癌，其发生和转移更依赖于新生血管的形成。近年来的研究表明，肿瘤血管生成与宫颈癌的发生发展密切相关，可用于判断预后和观察疗效。微血管密度（microvascular density，MVD）被公认为是反映肿瘤血管生成的最有效的客观指标。CD105（Endoglin）是新生血管内皮细胞特异性标志物，仅在增殖活跃的血管内皮细胞中强表达，比以往血管标记因子更具优越性。增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）是一种酸性核蛋白，为DNA聚合酶d的辅因子，主要在G1早期和S后期诱导DNA的合成，对DNA复制的调节起重要作用。环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）是分解花生四烯酸（arachidonic acid，AA）生成各种内源性前列腺素（prostaglandons，PGs）过程中重要的限速酶，它能引起炎症反应并通过多种机制促进肿瘤新生血管的生成。本实验以免疫组化SP法检测正常宫颈组织、癌前病变及宫颈鳞状细胞癌中CD105、COX-2及PCNA的表达，旨在探讨微血管密度及细胞增殖在宫颈鳞状细胞癌发生和发展中的作用及相互关系，为临床合理选择手术方式及判断预后、抗肿瘤治疗新方法提供有价值指标及理论依据。材料与方法1实验材料：宫颈标本共96例，其中正常宮颈组织32例，宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅰ级7例，CINⅡ级9例，CINⅢ级18例，宫颈鳞状细胞癌共30例。所有取材的标本术前均未接受过放疗及化疗，各标本均经病理证实。在30例宫颈鳞状细胞癌中，年龄24～65岁，平均年龄43岁；临床分期采用国际妇产科联盟（international federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）2000年修订的临床分期标准，ⅠA期7例，ⅠB期11例，ⅡA期7例，ⅡB期5例；30例宫颈鳞状细胞癌中26例做盆腔淋巴结清扫术，发现有淋巴结转移者5例。2实验方法：应用免疫组化SP染色法检测CD105，PCNA，COX-2在宫颈鳞状细胞癌及癌前病变和正常宫颈组织中的表达水平，计数CD105标记的阳性微血管数目，计算平均MVD值；以PCNA阳性细胞数计算增殖细胞指数（priliferation index，PI）；图象分析系统计算COX-2灰度值。所有数据资料均采用SPSS11.0软件包进行统计分析。计量资料均以a=0.05为检验标准。结果1 CD105蛋白主要表达于新生血管的内皮细胞胞膜或胞浆，呈棕黄色颗粒，被标记的阳性血管主要位于癌巢周围的间质组织。MVD在正常宫颈中为5.13±2.30，在CINI中为11.57±1.40，在CINⅡ中为11.44±3.54，在CINⅢ中为12.56±2.20，在宫颈鳞癌中为15.40±2.90；在宫颈鳞癌中，高分化为14.71±2.43，中分化为13.77±2.24，低分化为18.00±2.16，低分化与前两种间差别有统计学意义；依据FIG02000标准，Ⅰ期为14.17±2.68，Ⅱ期为17.25±2.18，差别具有统计学意义；在进行淋巴结清扫中发现有转移者MVD为18.00±2.35，无转移者为15.10±2.76，差别具有统计学意义；以40岁将对象分为高低两个年龄组，年轻组为16.64±2.20，年老组为14.68±3.06，其间差别不具有统计学意义。2 PCNA主要表达于增殖期细胞的细胞核，将细胞核染为棕黄色，见于肿瘤细胞的胞核、不典型增生的细胞胞核及部分宫颈正常鳞状上皮基底层处于增殖期的细胞胞核；在癌巢中呈弥漫性表达，表现为阳性细胞成团分布。PI值在正常宫颈中为4.97±2.65，在CINⅠ中为14.14±3.02，在CINⅡ中为16.78±2.33，在CINⅢ中为31.22±3.61，在宫颈鳞状细胞癌中为44.27±3.74；在宫颈鳞癌中，高分化为40.86±3.13，中分化为43.69±3.09，低分化为47.40±2.31，三者间差别有统计学意义；FIGOⅠ期为42.39±3.26，Ⅱ期为47.08±2.47，差别具有统计学意义；淋巴结转移组为48.80±1.10，无转移组为44.00±3.15，两种间差别有统计学意义；年轻组为45.36±2.94，年老组为43.63±4.07，两者间差别不具有统计学意义。3 COX-2蛋白阳性表达为细胞浆着色，阳性细胞主要是肿瘤细胞、不典型增生细胞及部分取活检部位的炎症反应细胞。阳性细胞为棕黄色，着色深浅有差异。COX-2灰度值在正常宫颈中为104.90±1.72，在CINⅠ中为115.05±2.75，在CINⅡ中为115.42±3.03，在CINⅢ中为120.52±1.84，在宫颈鳞状细胞癌中为132.79±2.24；在宫颈鳞癌病理分级中，高分化为130.16±1.65，中分化133.22±1.36，低分化134.08±2.11，高分化与中、低分化间差别有统计学意义，但中、低分化间差别无意义；FIGOⅠ期中为132.23±1.79和Ⅱ期中133.62±2.66间的差别不具有统计学意义；淋巴结转移组为135.70±1.60和无转移组132.30±1.84间差别具有统计学意义；年轻组134.06±2.01与年老组132.06±2.08间差别具有统计学意义。结论1 CD105标记的MVD与宫颈鳞状细胞癌的病理分级及FIGO临床分期密切相关，说明血管生成与宫颈鳞状细胞癌的恶性程度及病变范围有关，印证了肿瘤血管生成理论。MVD与淋巴结是否转移亦有关，说明血管生成促进了宮颈鳞状细胞癌体积增大，符合宫颈癌直接蔓延的转移途径，并且容易使与宫颈鳞状细胞癌浸润淋巴管，形成瘤栓，随淋巴液引流到达局部淋巴结。2 PCNA标记的PI在正常宫颈、CIN各级及宫颈鳞状细胞癌中的表达差异具有显著性。PCNA的表达与宫颈鳞状细胞癌的病理分级、FIGO分期密切相关，并与淋巴结转移正相关，说明宫颈鳞状细胞癌的增殖能力越强，恶性程度越高，淋巴结转移能力就越强，可作为宫颈鳞状细胞癌的早期诊断指标。3 COX-2在正常宮颈、CIN各级及宫颈鳞状细胞癌中的表达差异具有显著性。COX-2在不同FIGO分期的宫颈鳞状细胞癌患者中的表达无明显差异，与宫颈鳞状细胞癌的淋巴结转移、患者年龄及病理分级呈正相关。在宫颈鳞状细胞癌中，COX-2的表达与患者年龄有关，可能是年轻患者相对性生活比较活跃，有较多患者合并慢性宫颈炎，致使COX-2在年轻患者中表达较高。4 CD105、PCNA及COX-2在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞状细胞癌中的表达有显著性差异，并且三者的表达呈正相关；提示三者在诱导机制上存在关联，协同促进宫颈鳞状细胞癌的发生与发展。联合检测宫颈鳞状细胞癌中的MVD及PCNA值，有助于了解宫颈鳞状细胞癌细胞的生物学行为，指导临床治疗及预后判断，并提示使用血管生成抑制药物及COX-2特异性抑制药物可以起到抑制实体肿瘤发展的作用。