论文摘要
目的从Ib期宫颈鳞癌cDNA微阵列筛查出的与早期宫颈鳞癌（Squamous CervicalCarcinoma,SCC）淋巴结转移相关的表达序列标签（expressed sequence tags,EST）出发,采用cDNA末端快速扩增法（RACE法）在宫颈鳞癌组织中扩增得到基因的全长,进而从基因（mRNA）水平和蛋白水平在早期SCC中进行验证,为研究早期SCC淋巴结转移的分子机制提供线索。方法首先对筛选出的与早期SCC淋巴结转移相关的EST设计引物,采用反转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCT）验证其在早期SCC中的表达;然后,对验证结果可靠的EST设计特异引物,在SCC组织中用cDNA末端快速扩增法（RACE）扩增EST所对应的基因的全长,并克隆和测序,再将测序结果进行初步的生物信息学分析;最后,用RT-PCR法检测扩增出的基因在早期SCC组织中的基因水平的表达,用酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ELISA）测定巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）在早期SCC患者血清中的浓度,并用RT-PCR、ELISA、免疫组织化学法（Immunohistochemistry,IHC）检测MIF在宫颈鳞癌高转移Caski细胞株和低转移Siha细胞株中的表达。结果（1）经RT-PCR实验验证,AI140221在无转移的早期SCC中的表达显著高于有转移早期SCC组织中的表达（P＜0.005）;AI870661、AI985548、ADCAPE03和ADCAPB08在有转移的早期SCC中的表达均高于其在无转移的早期SCC中的表达（P＜0.01,P＜0.005）。其中AI985548已在NCBI上申请得到了GenBank序列号:EL812776（2）对AI870661设计3’RACE的特异引物,在早期SCC中用RACE法扩增出了MIF基因,测序结果为485bp,与GeneBank中公布的MIF基因序列和蛋白序列均有95%的同源性。向NCBI递交该序列,现已取得GenBank序列号:EF492869。在该3’RACE的过程中还发现一条新的EST。该EST也已在NCBI上申请得到了GeneBank序列号:EL812774（3）MIF的RT-PCR、ELISA结果经统计学分析,其在无转移的早期SCC中的表达高于在正常宫颈组织中的表达,且在有转移的早期SCC中的表达高于在无转移的早期SCC中的表达（P＜0.01,P＜0.05）;扩增出的新的EST经RT-PCR法的检验,其在无转移的早期SCC中的表达高于在正常宫颈组织中的表达,在转移的早期SCC中的表达高于无转移的早期SCC（P＜0.01,P＜0.05）。MIF在宫颈鳞癌CaSki细胞株中的mRNA和蛋白水平表达都高于Siha细胞株。结论第一次从EST出发用RACE法在早期宫颈鳞癌中扩增得到MIF基因,并在早期宫颈癌组织中发现了一条新的EST。验证了6条与宫颈鳞癌淋巴结转移相关的EST。并从组织水平验证了MIF在早期SCC中的表达显著高于在正常宫颈组织中的表达,在有转移的早期SCC中的表达显著高于无转移的早期SCC;从细胞水平验证了MIF在宫颈鳞癌高转移CaSki细胞株中的表达都高于低转移Siha细胞株。提示MIF很可能参与了宫颈鳞癌的发生和转移。进一步寻找和研究这些EST所对应的基因及对MIF因子的深入研究有利于早期宫颈癌淋巴结转移分子机制的研究。
论文目录
相关论文文献
标签：早期宫颈鳞癌论文; 表达序列标签论文; 末端快速扩增论文; 巨噬细胞迁移抑制因子论文;