大鼠的运输应激及谷氨酰胺的抗应激研究

论文摘要

本研究利用一个模拟运输振动的装置,建立大鼠模拟运输应激模型,并通过灌饲条件性必需氨基酸谷氨酰胺（Glutamine,Gln）观察了其对大鼠血清及各相关组织中氨基酸谱、相关生化指标和骨骼肌热休克蛋白mRNA表达的影响。探讨了谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠保护的可能机制,深化了对Gln生物学功能的认识,为动物运输应激的防护提供了新思路。1反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定大鼠血清及组织中游离的氨基酸以邻苯二甲醛（OPA）为衍生剂,柱前衍生,Waters Spherisorb ODS柱（4.6mm×250mm,5μm）柱分离,梯度洗脱,荧光检测,在40分钟内15种氨基酸全部得到分离。在5.20-333nmol·L-1浓度范围内,氨基酸的峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数在0.9993-1之间。不同氨基酸测定的日内、日间精密度分别为2.01%-5.53%和3.65%-5.88%。最低检测限为1.2nmol·L-1。测定大鼠血清及下丘脑、肝脏、肌肉、心脏和肾脏等组织中的游离氨基酸,不同氨基酸在大鼠血清、下丘脑、肝脏、肌肉、心脏和肾脏等组织中的回收率分别为107.10%-122.28%、90.90%-110.95%、98.96%-119.95%、90.33%-111.30%、93.82%-126.51%、90.39%-144.15%之间。本方法处理迅速,操作简单,有好的线性和回归系数,可以作为定性或定量的依据。2谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠血清和组织中氨基酸谱的影响实验采用70只雄性SD大鼠,设阴性对照组（-）10只,其他60只大鼠分别模拟低频（4Hz）和高频（6Hz）两种汽车公路运输振动频率,每种处理实验大鼠30只,并分别设有阳性对照组（+）,苯巴比妥组（P）和谷氨酰胺组（Q）,每组10只。（-）组和（+）组每天分别灌饲生理盐水（1mL/只）,P组和Q组每天分别灌饲苯巴比妥(15mg·Kg-1/只)和谷氨酰胺(500mg·Kg-1/只),连续10天,每天1次。10天后,除（-）组外,其他6组分别模拟低频（L）和高频（H）运输应激2小时。然后处死大鼠,取血清、下丘脑、肝脏和骨骼肌,采用RP-HPLC法分析模拟运输应激后其中游离氨基酸含量的变化。结果:与阴性对照组相比,补充谷氨酰胺后,低频或高频应激大鼠的血清、下丘脑和骨骼肌中与应激密切相关的部分生糖氨基酸,芳香族氨基酸（AAA）和支链氨基酸（BCAA）含量都没有显著差异（P＞0.05）,而与阳性对照组相比,上述指标均差异显著（P＜0.05）或差异极显著（P＜0.01）。而镇静药物苯巴比妥对抗运输应激则没有效果。本实验证实,谷氨酰胺具有保护大鼠抵抗运输应激的作用。3谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠主要相关生化指标及HSP72mRNA表达的影响实验设计同第二部分,分析肌酸激酶（Creatine Kinase,CK）、乳酸脱氢酶（LactateDehydrogenase,LDH）的活性以及血糖（blood glucose）、肌糖原（muscle glycogen）、肝糖原（liver glycogen）的变化及骨骼肌HSP72mRNA表达的影响。结果显示:与阴性对照组相比,补充谷氨酰胺后,低频或高频应激大鼠的血清、肝脏和骨骼肌CK、LDH、血糖以及肌糖原、肝糖原都没有显著差异（P＞0.05）,L（+）和H（+）组HSP72mRNA表达显著升高（P＜0.05）,LQ和HQ组HSP72mRNA表达极显著升高（P＜0.01）。镇静药物苯巴比妥对抗运输应激则没有效果。本实验结果表明,谷氨酰胺具有保护大鼠抵抗运输应激的作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 动物应激及目前的研究进展
• 1 应激的概念及应激对机体的影响
• 2 应激的种类及目前的研究状况
• 参考文献
• 第二章 氨基酸的营养生理功能
• 1 氨基酸的分类
• 2 体内氨基酸的分布与代谢
• 3 氨基酸的转化
• 4 谷氨酰胺的生理生化功能
• 参考文献
• 第三章 运动疲劳应激时氨基酸的代谢
• 1 运动疲劳应激对氨基酸代谢的影响
• 2 运动疲劳应激时谷氨酰胺的代谢
• 参考文献
• 第二篇 试验研究
• 第一章 反相高效液相色谱测定大鼠血清及组织中游离的氨基酸
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• Abstract
• 参考文献
• 第二章 谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠血清和组织中氨基酸谱的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• Abstract
• 参考文献
• 第三章 谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠主要相关生化指标及HSP72mRNA表达的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论与小结
• Abstract
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 附录
• 硕士期间发表的文章