论文摘要
目的:构建针对血管内皮生长因子（VEGF）和趋化因子受体4（CXCR4）慢病毒介导的RNA干扰载体,通过体外实验和体内实验观察卵巢癌细胞VEGF和CXCR4表达受抑制后对癌细胞增殖和侵袭转移情况的影响,部分阐明VEGF/CXCR4基因表达被抑制后对卵巢癌的发生与进展的影响,为针对VEGF/CXCR4基因的RNA干扰技术的临床应用奠定基础。方法:（1）将VEGF基因mRNA和CXCR4基因mRNA作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的在线服务,设计多个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6和H1启动子的慢病毒载体FIV-based Lentivector Expression System上,构建成抑制VEGF和CXCR4基因表达的RNA干扰（siRNA）表达载体。（2）体外实验中,将上述载体转染人卵巢癌细胞株sw626,通过Real time PCR和Western blot观察干扰载体对VEGF和CXCR4表达的抑制效果;通过CCK8检测对肿瘤细胞增殖的影响;通过重建基底膜实验检测细胞体外侵袭能力的变化。（3）体内实验中,将上述载体转染细胞后注射裸鼠建立卵巢癌模型;通过检测成瘤率、成瘤时间、瘤体大小、绘制生长曲线,观察靶基因表达受抑制后,肿瘤增长的变化。肿瘤组织通过检测CD34表达对MVD进行比较,同时采用TUNEL检测肿瘤组织凋亡的变化。结果:（1）成功构建了抗VEGF和CXCR4的siRNA慢病毒表达载体系统,测序证实序列正确。（2）体外实验中,通过Real time PCR和Western blot,在人卵巢癌细胞株sw626中,VEGF和CXCR4慢病毒表达载体能明显抑制靶基因的表达;CCK8显示,当VEGF受抑制后,肿瘤细胞增殖受抑;重建基底膜实验证实CXCR4表达受抑后细胞体外侵袭能力显著降低。（3）体内实验中,VEGF和CXCR4被抑制后可减缓瘤体增长,肿瘤组织MVD下降,细胞凋亡增加。结论:（1）针对VEGF和CXCR4基因的siRNA慢病毒表达载体能够显著抑制靶基因的表达（2）当VEGF受抑制后,肿瘤细胞增殖受抑,MVD降低,肿瘤体积显著减小,细胞凋亡增加。（3）当CXCR4受抑后,肿瘤细胞侵润能力明显下降,肿瘤组织增殖受抑,MVD下降,凋亡增加。