论文摘要
目的:多囊卵巢综合症（PCOS）是十分常见的妇科内分泌疾病,在我国有着庞大的患病人群。本研究利用PCOS大鼠模型,通过观察生长分化因子-9（growth differentiation factor-9, GDF-9）及前列腺素E2的合成限速酶-环氧合酶-1（Cyclooxygenase-1, COX-1）在多囊卵巢和正常卵巢表达,研究GDF-9、COX-1在卵泡发育过程中表达规律,探讨其在PCOS大鼠和正常大鼠卵巢局部调节中的作用,以及其在PCOS卵泡发育停滞、优势化选择受阻的原因。材料与方法:选85日龄左右雌性Sprague Dawley（SD）大鼠55只,随机分成两组,A组35只,B组20只。A组通过Poretsky法建立PCOS模型为PCOS组,B组为正常对照组。两组大鼠均于给药22天后禁食水,次日麻醉,取血,3000r/min离心20分钟,收集血清样品,-20℃储存,采用放摄免疫分析法（RIA）测定血清中睾酮（T）、黄体生成素（LH）及空腹胰岛素（FINS）含量,取出双侧卵巢组织,称重,并将卵巢组织以其长径剖开,右侧卵巢组织固定于4%中性福尔马林中24h后,做成石蜡包块,应用免疫组化法测定GDF-9、COX-1在卵巢中的分布和表达。左侧卵巢组织-80℃冻存,流式细胞术（flow cytometry, FCM）检测GDF-9。统计学分析:RIA结果的数据用x±s表示,组间差异用t检验;免疫组化结果用χ2检验。所有数据均用SPSS11.5软件包进行统计。p<0.05为差别显著。结果:1大鼠体重:PCOS组造模后体重显著高于正常对照组（p<0.01）。2卵巢大体解剖形态观察:PCOS组卵巢体积明显增大,表面苍白,可见多个囊状扩张的卵泡,黄体减少;正常对照组卵巢色泽红润,黄体较PCOS组明显增加。PCOS组卵巢重量显著高于对照组（p<0.01）。3卵巢组织学检查:PCOS组可以看到早期发育的较多的原始卵泡和不正常的卵泡（包括闭锁卵泡）,囊状扩张的卵泡数量明显增加,颗粒细胞层数减少至2-3层,卵冠丘复合体消失,黄体数量明显下降并伴有不完全的黄素化;正常对照组镜下见多个黄体及不同发育阶段的卵泡,卵泡内颗粒细胞呈多层,多为8-9层。4血清性激素水平比较:PCOS组血清T、LH、FINS浓度显著高于正常对照组（p<0.01）。5 GDF-9在PCOS卵巢中的表达:免疫组化结果显示:GDF-9表达于PCOS组的初级卵泡、次级卵泡及窦状卵泡的卵母细胞胞浆中,颗粒细胞胞浆及卵泡膜细胞胞浆亦有表达,与正常对照组表达相似。GDF-9在PCOS组原始卵泡卵母细胞胞浆中未见表达,但在正常对照组有表达。GDF-9在PCOS组的表达低于其在正常对照组的表达,差异有统计学意义（p<0.05）。GDF-9在PCOS组与正常对照组各阶段卵泡的表达强度相比均呈降低趋势,在初级卵泡和次级卵泡阶段尤为明显,差异有统计学意义（p<0.05）。GDF-9在PCOS组颗粒细胞表达低于其在正常对照组的表达,差别有统计学意义（p<0.05）。GDF-9在PCOS组卵泡膜细胞表达高于其在正常对照组的表达,差别有统计学意义（p<0.05）。在正常对照组中,GDF-9在卵泡膜细胞的表达亦高于其在颗粒细胞的表达,差别有统计学意义（p<0.05）。GDF-9在两组间表达强度相比没有统计学意义（p>0.05）。流式细胞技术检测PCOS组GDF-9表达量明显低于对照组,差别有统计学意义（p<0.01）。6 COX-1在PCOS卵巢中的表达:免疫组化结果显示:COX-1在卵巢的颗粒细胞和卵泡膜细胞内均有明显表达。在PCOS组,COX-1在卵泡膜细胞表达高于其在颗粒细胞的表达,两者相比有统计学意义（p<0.05）。在正常对照组,COX-1在颗粒细胞的表达高于其在卵泡膜细胞的表达,两者相比有显著统计学意义（p<0.01）。COX-1在PCOS组卵泡膜细胞的表达高于其在正常对照组的表达,两者相比有显著统计学意义（p<0.01）,但两组在颗粒细胞表达相比,差异无统计学意义（p>0.05）。结论:1 Poretsky法建立PCOS大鼠模型成功。2 GDF-9对PCOS的卵巢和正常卵巢的各级卵泡发育均有影响,其表达异常可能是PCOS患者卵泡发育停滞延缓、成熟障碍重要因素之一。3 GDF-9可能参与了PCOS卵巢来源的雄激素水平增高的过程。4 COX-1在PCOS卵巢局部表达异常,可能与PCOS的发病有关。