小菜蛾不同发育阶段肠道细菌多样性分析

小菜蛾不同发育阶段肠道细菌多样性分析

论文摘要

小菜蛾(Plutella xylostella)是一种危害性极大的十字花科蔬菜害虫,在所有栽培十字花科蔬菜的地区都有分布,被认为是分布最广的鳞翅目昆虫,对农业生产造成很大的威胁。以往对于小菜蛾防治的研究多集中在寻找其天敌、研究天敌与小菜蛾之间的关系以及昆虫病原微生物的利用。本文利用bar-coded 454焦磷酸测序技术研究小菜蛾幼虫、蛹以及成虫肠道细菌的多样性,探讨小菜蛾肠道菌群的生理功能和生态学意义,进一步了解小菜蛾与肠道细菌之间的协同进化,为利用细菌防治小菜蛾提供新的思路。主要研究结果如下:小菜蛾幼虫肠道细菌主要由五个纲组成,变形菌门Proteobacteria的丙型变形菌纲Gammaproteobacteria是幼虫肠道的主要优势细菌(占细菌总量的70.06%),其次是厚壁菌门Firmicutes的芽孢杆菌纲Bacilli、变形菌门的乙型变形菌纲Betaproteobacteria、变形菌门的甲型变形杆菌纲以及拟杆菌门Bacteroidetes的黄杆菌纲Flavobacteria。丙型变形菌纲Gammaproteobacteria肠杆菌目Enterobacteriales是目级分类水平上最多的肠道细菌类群。而肠杆菌目Enterobacteriales的肠杆菌科Enterobacteriaceae则为科级分类水平上最多的肠道细菌类群,占57.89%。小菜蛾蛹期肠道细菌主要分属两个纲:变形菌门Proteobacteria的丙型变形菌纲Gammaproteobacteria(99.58%)和厚壁菌门Firmicutes的芽孢杆菌纲Bacilli(0.42%)。小菜蛾肠道中变形菌门Proteobacteria细菌主要由肠杆菌目Enterobacteriales的肠杆菌科Enterobacteriaceae组成,占细菌总量的99.58%。厚壁菌门Firmicutes主要由乳杆菌目Lactobacillales的肉杆菌科Carnobacteriaceae组成,占0.42%。Enterobacteriaceae是小菜蛾蛹期肠道中的优势菌群。小菜蛾成虫肠道细菌包括乙型变形菌纲Betaproteobacteria (0.14%)和丙型变形菌纲Gammaproteobacteria (99.86%)。乙型变形菌纲Betaproteobacteria由伯克氏菌科Burkholderiaceae (0.08%)和丛毛单胞菌科Comamonadaceae (0.05%)组成;丙型变形菌纲Gammaproteobacteria由肠杆菌科Enterobacteriaceae(99.86%)组成。Enterobacteriaceae仍为小菜蛾成虫肠道细菌的优势菌群。小菜蛾幼虫、蛹、成虫肠道细菌差异分析表明丙型变形菌纲Gammaproteobacteria肠肝菌目Enterobacteriales的肠杆菌科Enterobacteriaceae是小菜蛾三个发育时期肠道细菌的主要组成部分。随着小菜蛾的生长,取食习性的改变,其肠道细菌也跟着改变,小菜蛾幼虫肠道细菌较其他两个发育时期具有明显的多样性。在门级分类水平上,幼虫肠道细菌有三个门:变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门;蛹肠道细菌有两个门:变形菌门和厚壁菌门;而成虫肠道细菌则只有变形菌门。在目级分类水平上,幼虫肠道细菌有八个目:黄杆菌目Flavobacteriales(拟杆菌门黄杆菌纲)、芽孢杆菌目Bacillales(厚壁菌门芽孢杆菌纲)和乳杆菌目Lactobacillales(厚壁菌门芽孢杆菌纲)、鞘脂单胞菌目Sphingomonadales(变形菌门甲型变形菌纲)、伯克氏菌目Burkholderiales(变形菌门乙型变形菌纲)、肠肝菌目Enterobacteriales(变形菌门丙型变形菌纲)、假单胞菌目Pseudomonadales(变形菌门丙型变形菌纲)以及黄色单胞菌目Xanthomonadales(变形菌门丙型变形菌纲)。蛹和成虫肠道细菌都只有两个目。蛹肠道细菌主要是:乳杆菌目Lactobacillales(厚壁菌门芽孢杆菌纲)和肠杆菌目Enterobacteriales(变形菌门丙型变形菌纲);成虫肠道细菌主要是:伯克氏菌目Burkholderiales(变形菌门乙型变形菌纲)和肠肝菌目Enterobacteriales(变形菌门丙型变形菌纲)。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  • 1.1 昆虫共生微生物研究进展
  • 1.2 昆虫体内细菌的分布情况
  • 1.2.1 昆虫肠道
  • 1.2.2 其他部位分布情况
  • 1.3 肠道共生菌在昆虫体内的生理作用和意义
  • 1.3.1 参与昆虫内部重要反应
  • 1.3.2 帮助消化一些难以消化的物质
  • 1.3.3 解毒作用
  • 1.3.4 影响昆虫生殖活动
  • 1.3.5 防御外来病菌和参与昆虫天敌之间的作用
  • 1.4 小菜蛾及其肠道细菌研究进展
  • 1.4.1 小菜蛾肠道细菌种类
  • 1.4.2 小菜蛾肠道细菌对小菜蛾的生理功能
  • 1.4.3 小菜蛾肠道细菌与生物农药的相互作用
  • 1.5 昆虫肠道细菌的研究方法
  • 1.5.1 传统微生物分离培养方法
  • 1.5.2 分子生物学研究方法
  • 1.6 本项研究的意义与创新点
  • 1.6.1 本项研究的目的和意义
  • 1.6.2 本项研究的创新点
  • 2 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 常用试剂
  • 2.1.2 试验仪器
  • 2.2 试验方法
  • 2.2.0 小菜蛾的饲养
  • 2.2.1 小菜蛾幼虫肠道的解剖
  • 2.2.2 小菜蛾蛹肠道的解剖
  • 2.2.3 小菜蛾成虫肠道的解剖
  • 2.2.4 小菜蛾肠道细菌454测序及分析
  • 3 结果与分析
  • 3.1 小菜蛾幼虫肠道细菌
  • 3.1.1 小菜蛾幼虫肠道细菌454测序
  • 3.1.2 OTU注释
  • 3.1.3 小菜蛾幼虫肠道细菌分类等级注释
  • 3.1.4 小菜蛾幼虫肠道细菌多样性
  • 3.2 小菜蛾蛹肠道细菌
  • 3.2.1 小菜蛾蛹肠道细菌454测序
  • 3.2.2 OTU注释
  • 3.2.3 小菜蛾蛹肠道细菌分类等级注释
  • 3.2.4 小菜蛾蛹期肠道细菌多样性
  • 3.3 小菜蛾成虫肠道细菌
  • 3.3.1 小菜蛾成虫肠道细菌454测序
  • 3.3.2 OTU注释
  • 3.3.3 小菜蛾成虫肠道细菌分类等级注释
  • 3.3.4 小菜蛾成虫肠道细菌多样性
  • 3.4 小菜蛾不同发育时期肠道细菌组成比较
  • 3.4.1 小菜蛾幼虫、蛹、成虫时期肠道细菌门分类水平上的比较
  • 3.4.2 小菜蛾幼虫、蛹、成虫时期肠道细菌纲分类水平上的比较
  • 3.4.3 小菜蛾幼虫、蛹、成虫时期肠道细菌目分类水平上的比较
  • 3.4.4 小菜蛾幼虫、蛹、成虫时期肠道细菌科分类水平上的比较
  • 4 讨论
  • 4.1 小菜蛾幼虫肠道细菌
  • 4.1.1 变形菌门
  • 4.1.2 厚壁菌门
  • 4.1.3 拟杆菌门
  • 4.2 小菜蛾蛹肠道细菌
  • 4.3 小菜蛾成虫肠道细菌
  • 4.4 小菜蛾幼虫、蛹、成虫肠道细菌比较
  • 5 结论与展望
  • 参考文献
  • 附录
  • 附录1 主要仪器
  • 附录2 常用术语缩写与中英文对照
  • 致谢
  • 相关论文文献

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