1.人参总皂苷对K562细胞信号传导及转录活化因子3表达的影响 2.青蒿水提物抗肺癌A549、乳腺癌MCF-7实验研究

论文摘要

目的:研究人参总皂苷（TSPG）体外作用K562细胞后信号传导及转录活化因子3 （STAT3）在细胞中的表达、分布情况和STAT3通路在K562细胞分化中的作用和相关机制。方法:K562细胞分为对照组、TSPG组。对照组:常规培养;TSPG组:在常规培养基础上加入TSPG（终浓度为200μg/ml）,分别作用6、12、24、36、48h。ELISA法测定对照组和TSPG组各时间点K562细胞浆和核内STAT3蛋白的表达、分布;SP免疫细胞化学染色法分析TSPG作用12、36 h组和对照组K562细胞胞浆和核内STAT3蛋白的表达,并对甩片进行图象分析; Western blotting法检测对照组及TSPG组K562细胞浆和核内STAT3蛋白的表达、分布;激光共聚焦显微镜观察对照组和TSPG作用12、36 h组K562细胞浆和核内STAT3蛋白的分布。结果:经TSPG诱导后K562细胞浆和核内STAT3蛋白表达和时间密切相关（P<0.01）,即TSPG作用36 h细胞浆和核内STAT3蛋白表达与对照组无显著差别,其他各时间组与对照组比较,有显著性差异（P<0.01）:细胞浆内STAT3蛋白吸光度对照组为0.350±0.040,TSPG作用6h时吸光度为0.306±0.038, 12h时吸光度降为0.170±0.037,降到最低, 24h吸光度为0.182±0.032, 48h吸光度为0.304±0.030;细胞核内STAT3蛋白吸光度对照组为0.536±0.224,TSPG作用6h时吸光度为0.597±0.247, 12h时吸光度升为0.762±0.249,升到最高, 24h吸光度为0.716±0.218,48h吸光度为0.576±0.148。免疫细胞化学结果显示TSPG作用时间12h时细胞浆内STAT3表达减少,细胞核内STAT3表达增多,STAT3蛋白由浆内向核内转移。36 h时浆内和核内STAT3表达与对照组无显著差别（P>0.05）。Western blotting显示TSPG诱导K562细胞后,其细胞浆和核内STAT3蛋白表达和时间密切相关（P<0.05）,对照组和TSPG组间比较有显著性差异（P<0.01）。激光共聚焦显微镜观察表明对照组STAT3绿色荧光蛋白主要呈月牙状分布在细胞浆内,细胞核内较少,TSPG作用12h时细胞浆内绿色荧光蛋白减少,核内STAT3绿色荧光蛋白增多,与红色细胞核颜色叠加呈现橙色,STAT3蛋白由浆内向核内转移。36h蛋白表达与对照组比较无显著差别（P>0.05）。结论:TSPG作用K562过程中,能诱导细胞内信号传导及转录活化因子3 （STAT3）表达变化,即由浆向核内转移;TSPG诱导K562细胞浆和核内STAT3蛋白表达和时间密切相关;TSPG诱导的STAT3可能在JAK-STAT信号转导通路中,对促进K562细胞向成熟方向分化,从而促进造血发挥重要作用。目的:研究青蒿水提物对肺癌A549、乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,阐述其抗肿瘤的初步机理。方法:水溶剂对青蒿素有机溶剂提取后残余母液进行有效成分提取,提取物纯化结晶。肺癌A549、乳腺癌MCF-7细胞株根据药物浓度分别分为6个小组,药物浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.125μg/ ml。采用MTT法检测各组作用24、48、72h,A549、MCF-7细胞的增殖情况;取各组细胞作用48h,通过流式细胞术（FCM）检测细胞周期、凋亡。结果:药物组对A549、MCF-7细胞的增殖抑制率与药物浓度和作用时间相关（P<0.01）。FCM细胞周期分析显示作用48h,药物组G0/G1期细胞比率与药物浓度呈正相关, G2/S期细胞比例与药物浓度呈负相关;药物组A549、MCF-7细胞的凋亡率增加,尤其当浓度达到100μg/ ml时,增幅明显。结论:青蒿水提物能有效抑制A549、MCF-7细胞增殖;并将细胞阻止在G0/G1期。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 实验一 人参总皂苷对 K562 细胞信号传导及转录活化 因子 3 表达的影响
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 实验二 青蒿水提物抗肺癌 A549、乳腺癌 MCF-7 实验研究
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一节 青蒿水提物抗肿瘤活性成分的提取与鉴定
• 第二节 青蒿水提物抗肺癌 A549、乳腺癌 MCF-7 实验研究
• 小结
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文