多效生长因子Pleiotrophin对Schlafen2基因表达的影响及其调控机制的研究

论文摘要

目的:在多效生长因子（Pleiotrophin,Ptn）基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中,研究Pleiotrophin对Schlafen2（Slfn2）基因表达的影响,以及在此调控过程中可能涉及的细胞因子;探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路。方法:前期研究发现,多效生长因子（Pleiotrophin,Ptn）基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中Schlafen2（Slfn2）基因高表达。在本实验中,（1）为了验证Ptn是否可能通过调控某种分泌型因子来抑制Slfn2表达,用Ptn稳定沉默细胞的培养液培养对照NC细胞,通过Northern杂交法检测培养不同时间后NC细胞中Slfn2表达水平变化,同时应用RT-PCR检测Ptn沉默细胞内IL-1a和IL-1f6表达水平,以及外源性PTN因子（终浓度50ng/μl）对Ptn沉默细胞内IL-1表达水平的影响;分别使用重组人白细胞介素-1受体拮抗剂（rhIL-lra）和IL-1a中和抗体阻断IL-1的作用通路,检测Ptn稳定沉默细胞中Slfn2基因表达变化。（2）为了探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路,应用Western印迹检测Ptn沉默细胞及NC细胞JNK磷酸化基础水平,以及外源性PTN因子（终浓度50 ng/μl）对Ptn沉默细胞JNK磷酸化水平的影响;用SP600125和SB203580特异性阻断JNK和p38通路,Northern印迹分析Ptn沉默细胞Slfn2基因转录水平的变化。（3）为了进一步验证Ptn沉默细胞内表达上调的IL-1是否也对JNK通路具有调控作用,分别使用重组人白细胞介素-1受体拮抗剂（rhIL-lra）和IL-1a中和抗体阻断IL-1的作用通路,应用Western印迹检测Ptn稳定沉默细胞中JNK磷酸化水平的变化。结果:（1）Ptn沉默细胞中Slfn2表达显著上调,Ptn沉默细胞培养液可以诱导对照细胞Slfn2表达;Ptn沉默后细胞内IL-1a和IL-1f6表达显著上调,外源性PTN能抑制沉默细胞中IL-1a和IL-1f6的表达;IL-1受体拮抗剂（rhIL-lra）和IL-1a中和抗体可抑制Ptn沉默细胞中Slfn2表达。（2）Ptn沉默诱导细胞内磷酸化JNK蛋白高表达,此诱导效应可被外源性PTN抑制;阻断JNK通路呈时间依赖性抑制Ptn沉默细胞中Slfn2基因表达;阻断p38通路对Ptn沉默细胞中Slfn2表达水平没有明显影响。（3）IL-1受体拮抗剂（rhIL-1ra）和IL-1a中和抗体可抑制Ptn沉默细胞中JNK磷酸化水平。结论:（1）Ptn对Slfn2基因表达具有负性调控作用,在此调控过程中IL-1家族是其中一种非常重要的调控因子。（2）Ptn可能通过抑制其下游JNK/MAPK通路来负调控Slfn2的表达。（3）Ptn沉默细胞内表达上调的IL-1也对JNK/MAPK通路具有调控作用

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 目录
• 前言
• 材料和方法
• 1 材料
• 2 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 在学期间的研究成果
• 致谢