石峰王亚东梁廷明阜宁县人民医院妇产科江苏阜宁２２４４００【中图分类号】R６【文献标识码】B【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０１０２－０１
结肠癌位居消化恶性肿瘤发病率第３位[１],好发于直肠和乙状结肠交界处,男性多发,其病因尚未定论,但是肿瘤相关因子表达水平的异常可能与结肠癌的发生、发展关系密切[２].其中Bmi－１是多疏基因家族的成员之一,其在白血病、肝癌等组织中发现表达水平异常[３].而p２１和p２７均为周期素依赖激酶抑制因子(Cyclin－dependentkinasesinhibitor,CDKI)成员,其功能抑制周期素依赖性激酶(Cyclin－dependentkinases,CDK)的活性,抑制细胞的增殖[４,５].本研究通过联合检测结肠癌中Bmi－１、p２１和p２７表达水平并检测其相关性,探讨上述３种基因在结肠癌的发生和发展中的作用.
１资料和方法
１．１病例资料２０１０年１月至２０１４年１２月,在我院进行结肠癌手术治疗的患者８０例,其中男５６例,女２４例,均经病理检查确诊,并均在术中留取瘤旁(距肿瘤２cm以上)结肠上皮组织作为对照.
１．２免疫组化方法均采用４％多聚甲醛固定,常规脱水包埋,切片厚度为５mm,常规脱蜡水化,３％过氧化氢孵育去除内源性过氧化物酶,微波修复抗原,一抗孵育过夜(一抗分别为鼠抗人Bmi－１单克隆抗体、鼠抗人p２１单克隆抗体和鼠抗人p２７单克隆抗体购自美国Abcam公司),PBS清洗后使用二抗(二抗均为羊抗兔抗体,均购自美国SantaCurz公司)孵育１h,PBS清洗后使用Elite－ABC(英国Vector公司生产)孵育３０min,清洗后使用DAB染色,清洗后苏木素复染３０sec,常规脱水、透明,中性树胶封片.１．３结果判断光镜下观察标本的着色程度.Bmi－１、p２１和p２７蛋白阳性表现均为细胞核和胞浆内出现棕黄色颗粒.随机选择５个高倍视野(４００×)计数肿瘤细胞总数和阳性细胞数,先按按阳性细胞百分比将０％、１－２５％、２６－５０％、５１－７５％、７６－１００％分别计为０、１、２、３、４分;然后同时根据染色程度的不同进行打分,０分为无色,,１分为浅黄色.２分为棕黄色,３分为棕褐色.将上述两种计分方法得分相乘,≤４分为－,５－８分为＋;９－１２分为＋＋,１３－１６分为＋＋＋.以＋＋和＋＋＋计为阳性表达.
１．４统计学分析采用SPSS１８．０统计学软件进行统计分析处理,率的比较采用c２检验,相关性采用Spearman相关分析,P＜０．０５为差异有统计学意义.
２结果
２．１Bmi－１、p２１和p２７在结肠癌组织和正常组织中的表达水平比较在结肠癌组织中,Bmi－１阳性率为８１．２５％,明显高于正常组织,差异具有统计学意义(c２＝４４．５５,P＜０．０５);p２１阳性表达率为２８．７５％,明显低于正常组织(c２＝３０．６３,P＜０．０５);p２３讨论肿瘤发生、发展时,与恶性肿瘤相关细胞因子的表达水平较正常组织发生明显改变,导致其相关的细胞周期发生明显的异常,引起细胞增殖的异常,导致肿瘤的发生[６].本次研究结果发现,Bmi－１在结肠癌组织中的阳性表达率明显升高,而p２１和p２７蛋白在结肠癌组织的阳性表达率明显降低,Bmi－１在Ducks分期较晚的C、D期和临床分期为III期的患者的阳性表达率明显的高于Ducks分期为A,B期和临床分期为I,II期的患者.而p２１和p２７的阳性表达率情况则正好和Bmi－１相反.研究结果表明,Bmi－１、p２１和p２７蛋白的阳性表达水平可以作为判断结肠癌预后的重要标志.我们的研究结果还发现,Bmi－１在结肠癌的阳性表达和p２１以及p２７呈负相关.动物实验表明,Bmi－１敲除小鼠的p２１、p２７在皮肤、骨骼等多个器官中的蛋白表达水平均明显上调[１１－１３],表明Bmi－１基因对p２１、p２７的蛋白表达水平具有一定的调控作用,和我们的研究结构基本一致.我们的研究结果表明,Bmi－１蛋白在结肠癌组织的阳性表达水平明显增加,p２１和p２７蛋白在结肠癌组织的阳性表达水平明显降低,并且Bmi－１的表达水平和p２１以及p２７呈负相关,表明Bmi－１蛋白在结肠癌组织过度表达,其可能对p２１以及p２７蛋白的负向调控在结肠癌的发生及发展中发挥重要作用,可以作为结肠癌预后判断的参考.
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