中药海桐皮抗肿瘤活性成分及G-四链体配体研究

论文摘要

海桐皮（五加科植物刺楸茎皮）为我国传统中药，具有凉血散瘀、祛风除湿等功效；广泛用于治疗跌打损伤、神经痛、风湿性关节炎等疾病。现代研究显示海桐皮含有常春藤皂苷元、单宁、黄酮、香豆素、酚酸等多种化学成分；还具有抗炎、抗糖尿病、抗真菌、抗肿瘤等生物活性。但是，对于海桐皮药材本身抗肿瘤活性物质的研究报道还比较少。本论文以体外抑制人肺癌A-549细胞增殖试验和稳定G-四链体CD变温试验为指导，基于高效液相色谱法快速筛选G-四链体配体的方法，充分利用离心分配色谱和高速逆流色谱的高效分离优势，对海桐皮所含成分进行了抗肿瘤活性的研究。1、海桐皮样品预处理及活性评价。采用75%乙醇浸提海桐皮，在MTT比色法测定海桐皮乙醇提物具有抗肿瘤活性，CD变温试验确定其可以稳定G-四链体的基础上，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对乙醇提取物进行分级萃取以达到分级分离；然后对各级产物进行MTT细胞试验和CD变温试验，实验结果表明：海桐皮乙醇提取物各级产物对人肺癌A-549细胞增殖具有不同程度的抑制作用，其中石油醚萃取物相对明显；海桐皮乙醇提取物乙酸乙酯萃取物对G-四链体具有较明显的稳定性作用。2、建立海桐皮乙醇提取物石油醚萃取物液相分析方法，采用离心分配色谱分离得到一单体化合物，经MS、1H-NMR、13C-NMR鉴定为鲁望桔内酯，经MTT比色法测定其对人肺癌A-549细胞增殖具有较强的抑制作用，其IC50为4.28μg/mL。此为首次在海桐皮中分离得到鲁望桔内酯，也是首次对其抗肿瘤活性进行研究。3、建立高效液相色谱法直接从海桐皮乙醇提取物乙酸乙酯萃取物中筛选G-四链体配体的方法，并结合高速逆流色谱法对可能与G-四链体相互作用的潜在配体进行分离纯化，经MS、1H-NMR、13C-NMR确定四种潜在配体分别为2,4-二羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸、5-阿魏酰奎宁酸。经CD变温实验确定其中三种化合物：2,4-二羟基苯甲酸、绿原酸、咖啡酸均为G-四链体配体，其分别可将G-四链体配体的熔点提高7℃、10℃和3℃。所建立的方法具有简便、快速等优点，对于研究活性化合物与靶点之间的相互作用具有很高的参考价值。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 前言
• 1.1 中药海桐皮
• 1.1.1 海桐皮的化学成分
• 1.1.2 海桐皮生物活性和药理作用
• 1.2 抗肿瘤药物筛选方法
• 1.2.1 MTT 筛选法
• 1.2.2 G-四链体识别筛选法
• 1.3 现代逆流色谱（CCC）简介
• 1.3.1 高速逆流色谱技术简介
• 1.3.2 离心分配色谱技术简介
• 1.4 选题的目的与研究内容
• 1.4.1 课题的目的及意义
• 1.4.2 课题研究内容
• 第二章 海桐皮样品预处理及活性评价
• 2.1 试验部分
• 2.1.1 主要原料仪器
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 实验方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 海桐皮样品预处理
• 2.2.2 海桐皮对肿瘤细胞的增殖抑制作用
• 2.2.3 海桐皮对 G-四链体的稳定性作用
• 2.3 结论
• 第三章 离心分配色谱法分离石油醚萃取物
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 主要原料试剂
• 3.1.2 主要仪器设备
• 3.1.3 实验方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 石油醚萃取物 HPLC 分析方法的建立及目标物质的确定
• 3.2.2 CPC 分离目标化合物
• 3.2.3 CPC 分离物 S1 的 HPLC 检测
• 3.2.4 化合物 S1 的结构鉴定
• 3.2.5 鲁望桔内酯 MTT 细胞实验结果
• 3.3 结论
• 第四章 HPLC 法直接从海桐皮乙酸乙酯萃取物中筛选 G-四链体配体
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 主要原料试剂
• 4.1.2 主要仪器设备
• 4.1.3 实验方法
• 4.2 实验结果与讨论
• 4.2.1 G-四链体的 CD 光谱
• 4.2.2 HPLC 法筛选乙酸乙酯萃取物中潜在的 G-四链体配体
• 4.2.3 HSCCC 对目标化合物进行分离纯化
• 4.2.4 HPLC 分析单体配体化合物与 G-四链体的相互作用
• 4.2.5 四种单体化合物的结构鉴定
• 4.2.6 四种单体化合物对 G-四链体的稳定性作用
• 4.3 结论
• 第五章 结论、创新点与展望
• 5.1 主要结论
• 5.2 本论文的创新点
• 5.3 后续研究工作的展望
• 参考文献
• 附录
• 1H-NMR 及¹³C-NMR图谱'>附录 A 化合物 S1 的 MS、¹H-NMR 及¹³C-NMR图谱
• 1H-NMR 及¹³C-NMR图谱'>附录 B 化合物 I 的 MS、¹H-NMR 及¹³C-NMR图谱
• 1H-NMR 及¹³C-NMR图谱'>附录 C 化合物 II 的 MS、¹H-NMR 及¹³C-NMR图谱
• 1H-NMR 及¹³C-NMR图谱'>附录 D 化合物 III 的 MS、¹H-NMR 及¹³C-NMR图谱
• 1H-NMR 及¹³C-NMR图谱'>附录 E 化合物 IV 的 MS、¹H-NMR 及¹³C-NMR图谱
• 在学期间发表的学术论文与研究成果
• 致谢