阪崎肠杆菌耐药性分析、超广谱β-内酰胺酶检测及耐药机制研究

论文摘要

本研究参照美国临床和实验室标准化研究所（CLSI）相关标准,采用药敏纸片方法,分别对分离自食品中的19株阪崎肠杆菌进行包括头孢唑啉、头孢噻吩、头孢哌酮、头孢曲松、头孢呋辛钠、头孢吡肟、庆大霉素、妥布霉素、氨曲南、氨苄西林、环丙沙星、氯霉素、四环素、苯唑西林、哌拉西林、美洛培南在内的共16种常规抗生素药敏检测。实验结果表明,19株阪崎肠杆菌对苯唑西林以及头孢噻吩的耐药率分别为100%和78.95%,而对其余种类抗生素均呈现敏感反应。另外,本实验还采用CLSI中关于肠杆菌科超广谱β-内酰胺酶检测标准,采用纸片扩散法对19株阪崎肠杆菌进行了超广谱β-内酰胺酶检测,同时参照数据库中超广谱β-内酰胺酶基因序列,采用涵盖四大类β-内酰胺酶,总共10种超广谱β-内酰胺酶扩增引物对菌株进行PCR检测,两种方法均未发现超广谱β-内酰胺酶阳性菌株,说明19株阪崎肠杆菌中不存在超广谱β-内酰胺酶。综合以上结果说明,目前食品中存在的阪崎肠杆菌仍为耐药性较弱的菌种,短时期内将不会对临床治疗带来较大威胁。在阪崎肠杆菌耐药检测的基础上,本论文还对阪崎肠杆菌耐药机制进行了初步研究。实验选取对头孢噻吩耐药性最强的8号阪崎肠杆菌,利用Tn-5转座子进行随机突变,以获得头孢噻吩耐药相关基因,结果共得到转座成功的阪崎肠杆菌单克隆共108株。以突变前菌株作为参照,通过抑菌浓度实验,检测在250μg/mL的头孢噻吩存在的条件下,生长受到明显抑制的阪崎肠杆菌突变株。结果显示,共5株阪崎肠杆菌突变株在该浓度头孢噻吩存在的状况下,生长受到明显抑制,表明该5株突变株中转座子元件的插入位点为阪崎肠杆菌对头孢噻吩的抗性基因。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 阪崎肠杆菌简介
• 1.1.1 阪崎肠杆菌分类
• 1.1.2 生物学特性
• 1.1.3 阪崎肠杆菌抗性
• 1.1.4 阪崎肠杆菌致病机制
• 1.1.5 污染来源
• 1.1.6 检测技术
• 1.2 耐药性
• 1.2.1 常用抗生素简介
• 1.2.2 细菌耐药性及其机制
• 1.2.3 耐药基因的发生机制
• 1.2.4 耐药性检测
• 1.3 超广谱β-内酰胺酶
• 1.4 转座子机制
• 1.4.1 寻找新基因和确定生物体基因组功能
• 1.4.2 利用转座子培育转基因动物
• 1.4.3 鉴别菌株及群体多样性
• 1.4.4 生态环境污染的生物修复
• 1.4.5 基因修复和基因治疗
• 1.5 研究目的及意义
• 1.6 研究内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌株
• 2.1.2 主要试剂、溶液及培养基
• 2.1.3 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 菌株活化
• 2.2.2 常规抗生素检测
• 2.2.3 超广谱β-内酰胺酶检测
• 2.2.4 头孢噻吩抗性机制初步研究
• 3 结果与讨论
• 3.1 常规抗生素检测
• 3.1.1 常规抗生素检测参考标准
• 3.1.2 质控菌株检测结果
• 3.1.3 阪崎肠杆菌对青霉素类抗生素药敏实验结果
• 3.1.4 阪崎肠杆菌对头孢类抗生素药敏实验结果
• 3.1.5 阪崎肠杆菌对碳青霉烯类抗生素药敏实验结果
• 3.1.6 阪崎肠杆菌对单环内酰胺类抗生素药敏实验结果
• 3.1.7 阪崎肠杆菌对氨基糖苷类抗生素药敏实验结果
• 3.1.8 阪崎肠杆菌对氟喹诺酮类抗生素药敏实验结果
• 3.1.9 阪崎肠杆菌对四环素抗生素药敏实验结果
• 3.1.10 阪崎肠杆菌对氯霉素药敏实验结果
• 3.1.11 8号菌株耐药性
• 3.2 超广谱β-内酰胺酶检测结果
• 3.3 头孢噻吩抗性机制初步研究
• 3.3.1 转座子转化结果
• 3.3.2 转座子转化验证
• 3.3.3 最低抑菌浓度实验结果
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 硕士期间论文发表情况
• 8 致谢