三七素临床前药物动力学和雷贝拉唑制剂生物等效性研究

论文摘要

三七素是一种非蛋白质氨基酸，存在于三七和人参等植物中。数千年来三七广泛用于跌打损伤、内伤出血等内外出血症。对三七等数十种生药进行了止血药理实验证明，其止血活性最强的单体成分为三七素。本论文对三七素在大鼠和犬体内的药物动力学与代谢进行研究，阐明三七素在大鼠和犬体内的动力学过程，研究三七素在大鼠体内的排泄和组织分布，此外还对三七素血浆蛋白结合和酶抑制方面进行了研究，为三七素的药理和毒理和临床研究提供参考依据。 雷贝拉唑是一种新型的质子泵抑制剂。本文建立了的液相色谱-质谱-质谱联用法测定人血浆中雷贝拉唑的浓度，重点考察了雷贝拉唑在各种处理条件下的稳定性。采用建立的方法对人体内雷贝拉唑的药物动力学和制剂生物等效性进行了研究。 一、三七素在大鼠和犬体内的药物动力学研究 以羧甲司坦（carbocystein）为内标，建立测定生物样品中三七素（dencichine）的液相色谱-串联质谱分析方法（LC／MS／MS），并进行了完整的方法确证。通过对质谱条件、色谱条件以及柱前衍生化方法的考察优化了分析方法。色谱柱为Zorbax XDB C8柱（150×4.6mm，I．D．，5μm），以甲醇-水-甲酸（35：65：0.5，v／v／v）为流动相，流速为0.5mL·min-1。采用大气压化学电离源（APCI源），以正离子方式检测，扫描方式为选择反应监测（SRM）。该法的线性范围为0.02-50μg·mL-1，定量下限0.02μg·mL-1，日内和日间精密度（RSD）均小于6.3％，准确度为-0.2％到3.9％之间，三七素和内标羧甲司坦在大鼠血浆中的提取回收率分别为97.1％和97.4％。本文建立的方法在灵敏度、动态范围和测试速度等方面均达到生物样品分析方法的要求。 采用建立的分析方法研究了三七素在大鼠和犬体内的药物动力学。大鼠静脉注射给予三七素(12.5，25，50mg·kg-1)后消除半衰期为10—14h。犬静脉注射给药(3.75，7.5，15mg·kg-1)后消除半衰期为14h，AUC与给药剂量具有线性关系。三七素在犬体内呈现线性动力学特征。 二、三七素在大鼠和犬体内的药物代谢研究 收集大鼠静脉给药前和给药后0-4、4-8、8-12、12-24、24-36和36-48h各时间段的尿样及粪样。采用LC／MSn法进行代谢产物研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语说明
• 第一章 绪论
• 1.1.衍生化在液相色谱质谱联用技术中应用的概况
• 1.2.止血类药物的研究现状
• 1.3.三七和三七素的研究概况
• 1.4.质子泵抑制剂的研究和发展概况
• 1.5.研究目的及方案
• 第二章 三七素在大鼠和犬体内的药物动力学研究
• 2.1.给药与样品采集
• 2.2.分析方法的建立
• 2.2.1.仪器及条件
• 2.2.2.血浆样品预处理
• 2.2.3.分析方法确证
• 2.2.4.分析方法优化
• 2.2.5.质谱条件优化
• 2.2.6.色谱条件的选择
• 2.2.7.样品预处理方法的优化
• 2.2.8.三七素异构体转化的研究
• 2.3.三七素在动物体内的药动学
• 2.3.1.三七素在大鼠体内的药动学
• 2.3.2.三七素在犬体内的药动学
• 2.4.讨论
• 第三章 三七素在大鼠和犬体内的药物代谢研究
• 3.1.代谢物的定性研究
• 3.1.1.大鼠尿样中代谢产物的鉴定
• 3.1.2.大鼠粪样中代谢产物的鉴定
• 3.1.3.大鼠胆汁中代谢产物的鉴定
• 3.1.4.犬血浆中代谢产物的鉴定
• 3.1.5.三七素在大鼠体内的代谢途径
• 3.2.代谢物对照品的制备
• 3.2.1.草酸单乙酯钾盐的合成
• 3.2.2.草酸单乙酯酰氯的合成
• 3.2.3.甘氨酸苄酯对甲苯磺酸盐的合成
• 3.2.4.草酰甘氨酸的合成
• 3.3.主要代谢物的动力学
• 3.3.1.分析方法的建立
• 3.3.2.仪器及条件
• 3.3.3.血浆样品预处理
• 3.3.4.分析方法的确证
• 3.3.5.3-氨基丙氨酸在犬体内的动力学
• 3.4.讨论
• 3.4.1.代谢物的定性研究
• 3.4.2.代谢物的合成
• 3.4.3.动力学研究
• 第四章 三七素自大鼠体内的排泄研究
• 4.1.尿样中三七素及代谢物3-氨基丙氨酸的分析方法
• 4.1.1.分析方法确证
• 4.2.尿样中草酰甘氨酸的分析方法
• 4.2.1.分析方法确证
• 4.3.粪样和胆汁中三七素的分析方法
• 4.3.1.分析方法确证
• 4.4.数据处理
• 4.5.结果
• 4.6.讨论
• 第五章 三七素在大鼠体内的组织分布、血浆蛋白结合和酶抑制研究
• 5.1.组织分布研究
• 5.1.1.组织样品中三七素的分析方法
• 5.1.2.分析方法确证
• 5.1.3.静脉注射给药后药物在大鼠体内的分布
• 5.2.三七素血浆蛋白结合率试验
• 5.2.1.试验方法
• 5.2.2.测定方法
• 5.2.3.结果
• 5.3.三七素的酶抑制试验
• 5.3.1.孵育体系
• 50'>5.3.2.测定IC₅₀
• 5.3.3.分析条件
• 5.3.4.结果
• 5.4.讨论
• 第六章 雷贝拉唑制剂的生物等效性研究
• 6.1.分析方法的建立
• 6.1.1.仪器及条件
• 6.1.2.血浆样品预处理
• 6.1.3.分析方法确证
• 6.2.雷贝拉唑制剂的生物等效性研究
• 6.2.1.给药方案与样品采集
• 6.2.2.未知样品测定
• 6.2.3.药物动力学参数的计算
• 6.2.4.制剂生物等效性评价
• 6.2.5.结果
• 6.3.讨论
• 6.3.1.质谱分析
• 6.3.2.稳定性
• 6.3.3.色谱分析
• 6.3.4.提取条件考察
• 第七章 实验部分
• 7.1.药品与试剂
• 7.2.溶液配制
• 7.2.1.标准溶液的配制
• 7.2.2.药物动力学研究中给药溶液的配制
• 7.2.3.其它溶液配制
• 7.3.仪器与设备
• 7.4.实验动物
• 7.5.三七素临床前药物动力学实验给药方案与样品采集
• 7.5.1.动力学研究
• 7.5.2.组织分布研究
• 7.5.3.排泄研究
• 7.5.4.代谢研究
• 7.6.代谢研究生物样品预处理
• 7.7.代谢研究实验条件
• 7.7.1.尿样乙酯化研究仪器及条件
• 7.8.生物样品中三七素的测定
• 7.8.1.血浆样品中三七素的测定
• 7.8.2.组织样品中三七素的测定
• 7.8.3.尿样中三七素的测定
• 7.8.4.粪样中三七素的测定
• 7.8.5.胆汁样品中三七素的测定
• 7.9.数据处理与统计分析
• 第八章 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简历
• 在学期间发表论文
• 附录