论文摘要
目的:通过比较白杨素（ChR）及其衍生物6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素（dFMAChR）在人结肠腺癌（Caco-2）细胞模型的跨膜转运及首过糖基化速率,为寻找具有良好的药动学特性的活性新化学实体提供实验依据。方法:建立精确灵敏、重复性好的ChR及dFMAChR的高效液相（HPLC）检测方法,并测定其理化性质;MTT法测定ChR和dFMAChR对Caco-2细胞的毒性作用。体外培养Caco-2细胞,用Transwell建立单层细胞模型;确定ChR和dFMAChR转运的最佳pH条件。评价时间、浓度对dFMAChR和ChR的双向转运的影响,HPLC检测药物含量,计算转运速率及表观渗透系数。评价时间对ChR和dFMAChR葡萄糖醛酸化产物形成的影响,用β-葡萄糖醛酸苷酶水解葡萄糖醛酸结合物,HPLC检测,计算葡萄糖基化速率。结果:50μmol/L的ChR和dFMAChR在pH 7.4,37℃的PBS中孵育24h后,两者的饱和溶解度分别是4.28±0.56μmol/L,2.05±0.44μmol/L。随着溶液pH升高dFMAChR稳定性（检测的原药量）较ChR的稳定性显著提高。MTT法测定结果表明,在一定浓度范围内,ChR和dFMAChR对Caco-2细胞毒性作用较小,即使两者浓度高达100μmol/L,受试物对Caco-2细胞的增殖活性无显著抑制作用。Caco-2细胞培养21天后,成功建立细胞单层模型。随着转运介质pH值升高,dFMAChR和ChR的转运速率降低,但相同浓度下dFMAChR的转运速率显著快与ChR的转运速率。ChR和dFMAChR的转运依赖于时间和浓度,几乎呈线性关系。从Apiral（A,肠腔面）到Basolateral（B,基底面）的转运占优势,但相差不大。而且,无论是从A-B侧转运还是从B-A侧转运dFMAChR较ChR转运速率显著提高。ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化产物随时间的增加而增加,dFMAChR较ChR的糖基化速率显著降低。结束转运时,均能在Transwell两侧检测到ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化产物,而且肠腔侧（A侧）检测代谢产物含量高于基底膜侧（B侧）。结论:白杨素经选择性引进三氟甲基和乙酰基后,获得的衍生物dFMAChR较白杨素化学稳定性提高,水溶性降低。在Caco-2模型中,dFMAChR和ChR均由被动扩散方式转运,dFMAChR的转运速率高于ChR,可能与其化学稳定性提高有关。另外,dFMAChR葡萄糖醛酸化程度较ChR显著降低说明其代谢稳定性增加,首过代谢是白杨素吸收差的主要原因之一。
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标签：白杨素论文; 二三氟甲基乙酰氧基白杨素论文; 跨膜转运论文; 首过代谢论文; 葡萄糖醛酸化论文;