铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶及相关整合子的研究

论文摘要

目的 检测和分析金属β-内酰胺酶及相关整合子在临床分离铜绿假单胞菌中的存在情况,通过对检测方法学进行探讨,为进一步在临床实验室监控金属β-内酰胺酶、整合子等抗生素抗性因子提供理论基础和实验依据。 方法 1)用VITEK32全自动微生物鉴定及药敏系统鉴定武汉大学人民医院2002年1月～2004年6月期间临床分离的铜绿假单胞菌,用琼脂稀释法检测菌株的最低抑菌浓度（MIC）,分析菌株药物敏感性,并筛选出耐亚胺培南和或耐头孢他啶的菌株;2)针对金属β-内酰胺酶基因blaVIM和blaIMP设计引物,采用聚合酶链反应（PCR）技术检测金属β-内酰胺酶的存在情况;3)分别以亚胺培南和头孢他啶为金属β-内酰胺酶底物,以乙二胺四乙酸二钠（EDTA·Na2）和2-巯基丙酸为金属β-内酰胺酶抑制剂,建立用于筛选产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的纸片扩散法,并与PCR法对比,进行方法学评价;4)针对整合酶基因intⅡ设计引物,采用PCR法检测Ⅰ型整合子-基因盒系统在铜绿假单胞菌中的存在情况;5)利用金属β-内酰胺酶基因引物和Ⅰ型整合子可变区两端保守区引物,进行整合子可变区的PCR-mapping和DNA测序,分析整合子-基因盒系统与金属β-内酰胺酶的关联性,并以此建立分析整合子可变区结构的PCR检测方法。 结果 1)2002年1月～2004年6月共从武汉大学人民医院临床各类标本中分离到铜绿假单胞菌567株,其中耐亚胺培南102株（18.0%）,耐头孢他啶143株（25.2%）,两者至少耐其一者共154株。2)PCR法共检出11株VIM-2样金属β-内酰胺酶携带株。此11株均耐亚胺培南和头孢他啶,占耐亚胺培南株总数的10.8%（11/102）。一株经测序证实所产金属β内酰胺酶确为VIM-2型。3)采用亚胺培南和EDTA·Na2的复合纸片法能有效筛选金属β-内酰胺酶。EDTA用量为0.25μmol/片,判定介值为7.0mm。与PCR结果相比,敏感性和特异性分别为90.9%和99.3%。4)耐亚胺培南铜绿假单胞菌I型整合子携带率为41.7%（42/102）,11株产金属β-内酰胺酶菌株全部携Ⅰ型整合子。5)整合子可变区的PCR-mapping分析表明Ⅰ型整合子-基因盒系统与金属β-内酰胺酶高度关联。对一株产VIM-2金属β-内酰胺酶菌株（IRPA2）进行PCR-mapping产物的DNA测序,结果表明,它是一个新的多重耐药整合子,与blaVIM-2关联,并含有新的aacA4等位基因(编码6’-N-氨基糖苷乙酰转移酶,介导细菌对氨基糖苷类抗生

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、引言
• 四、正文
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 五、参考文献
• 六、综述