论文摘要
目的:制备转CMV-EGFP基因小鼠并观察CMV启动子调控下转基因在胚胎早期阶段的表达情况。方法:用Ase I、AflⅡ双酶切质粒pEGFP-N1后,纯化回收1.6kb大小的DNA片段,稀释成3.2ng/ul的注射用DNA溶液,将其用显微注射的方法直接注入超排得到的B6D2F2的单细胞受精卵的原核内,体外培养至2-细胞后,一部分胚胎继续培养,体外观察转基因的表达情况,其余的移植到假孕昆白母鼠的输卵管内,待其怀孕产仔后,短波光下观察小鼠是否发出绿色荧光,同时抽提鼠尾DNA,用PCR法及SouthernBlotting法检测仔鼠是否为转基因阳性动物。结果:共注射了3264个受精卵,继续培养,有1779个胚胎发育至2-细胞,存活率为54.50%,将1397个存活的胚胎移植到71只假孕昆白母鼠的输卵管内,共有16只移植母鼠怀孕,得到85只仔鼠,PCR检测表明11只为转基因阳性小鼠,对其中的部分小鼠进一步进行Southern Blotting检测显示,1只为转基因阳性鼠。其余的382个胚胎继续培养,共有19个胚胎在荧光显微镜下发出绿色荧光,其中4个为纯合体、15个为嵌合体胚胎。结论:用原核注射法可以成功制备出转GFP基因小鼠,CMV启动子调控下的GFP基因在小鼠胚胎的早期阶段即可得到表达,但转基因并不一定能在胚胎内获得普遍性表达。
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