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脂溶性化感物质生物检测方法学研究及黄檗果皮化感物质的初步研究

2020-11-30阅读(661)

脂溶性化感物质生物检测方法学研究及黄檗果皮化感物质的初步研究

论文摘要

本论文结合药剂学知识,将细胞实验和动物实验中使用的增溶剂和助悬剂,用于脂溶性化感物质的生物检测。利用增溶剂和助悬剂能够增大脂溶性化感物质在水中的溶解性的功能,使脂溶性化感物质的生物检测过程更安全、准确。通过对吐温-80（Tween-80）、吐温-60（Tween60）、吐温-40（Tween40）、吐温-20（Tween20）、泊洛沙姆188（F-68）、卖泽52（S-40）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）在植物种子萌发及幼苗生长实验中使用的安全性和适用浓度进行试验和评价得知,吐温-80（Tween-80）、吐温-60（Tween-60）、吐温-40（Tween-40）、泊洛沙姆188（F-68）、卖泽52（S-40）的安全性较高,而吐温-20（Tween20）和羧甲基纤维素钠（CMC-Na）对受体种子萌发和幼苗生长的影响较大。安全浓度范围分别为,吐温-80（Tween-80）约14～1000mg/L,吐温-60（Tween-60）约28～5000mg/L,吐温-40（Tween-40）约31～1000mg/L;泊洛沙姆188（F-68）约0.2～4.0%;卖泽52（S-40）约0.5%。通过考察泊洛沙姆188（F-68）、吐温-80（Tween-80）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）增溶或助悬香草醛和阿魏酸对受体种子进行化感生物检测得知,脂溶性化感物质用泊洛沙姆188（F-68）、吐温-80（Tween-80）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）增溶或助悬后,形成的溶液是一个稳定的体系,试验过程中浓度不发生变化,可准确定量考察化感物质的活性强度。综上所述,就安全性而言,吐温-80（Tween-80）、吐温-60（Tween-60）、吐温-40（Tween-40）、泊洛沙姆188（F-68）、卖泽52（S-40）的安全性较高;就增溶或助悬效果而言,吐温-80（Tween-80）、吐温-40（Tween-40）、泊洛沙姆188（F-68）、卖泽52（S-40）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）的增溶或助悬效果较好。最后评价出泊洛沙姆188（F-68）的综合效果最好。通过对黄檗果皮化感物质进行分离提取和化感活性检测得知,黄檗果皮挥发油的化感抑制作用不显著,黄檗果皮90%乙醇粗提物的化感抑制作用极为显著。90%乙醇粗提物硅藻土拌样后,用正己烷、氯仿、丙酮、95%乙醇、50%乙醇依次洗脱,经化感活性检测得知,黄檗果皮90%乙醇提取物的95%乙醇组分中含有化感活性物质,化感活性生物检测显示,该组分在相当于每mL含果皮10～125mg时,对供试种子的发芽势和发芽率产生极显著的抑制作用,对苗高、根长、根重、地上部重也有极显著的抑制作用,且随着浓度的增加,抑制强度增强,在高浓度时能够完全抑制种子萌发和幼苗生长。对95%乙醇组分进行硅胶柱色谱分离,并进行化感活性追踪。在高极性部分分离到大量单体化合物α—D—葡萄糖及具有化感抑制作用的组分,采用高效液相色谱法（HPLC-ELSD）,测定95%乙醇组分浸膏中α—D—葡萄糖的含量约31.8%。在生物检测中发现,由于α—D—葡萄糖的存在,受体种子发芽所需时间延长,同时由于有此优质碳源的存在,引发大量霉菌生长,进一步对种子的萌发过程产生影响。这种现象与前期研究中发现的在黄檗果实果皮腐烂释放种子的过程中,有大量种子腐烂失活的现象相吻合。

论文目录

  • 前言
  • 摘要
  • Abstract:
  • 第一章 关于脂溶性化感物质研究方法的商榷
  • 第一节 对化感物质的认识
  • 第二节 化感物质的生物检测
  • 第三节 讨论
  • 第二章 脂溶性化感物质定量生物检测方法学研究
  • 第一节 增溶剂和助悬剂在化感生物检测中的安全性研究
  • 1 材料与仪器
  • 2 方法
  • 3 实验结果与分析
  • 3.1 吐温-80（Tween-80）对小麦种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.2 吐温-80（Tween-80）对白菜种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.3 吐温-60（Tween-60）对小麦种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.4 吐温-60（Tween-60）对白菜种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.5 吐温-40（Tween-40）对小麦种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.6 吐温-40（Tween-40）对白菜种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.7 吐温-20（Tween-20）对小麦种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.8 吐温-20（Tween-20）对白菜种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.9 小结
  • 3.10 泊洛沙姆188（F-68）对小麦种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.11 泊洛沙姆188（F-68）对白菜种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.12 卖泽52（S-40）对小麦种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.13 卖泽52（S-40）对白菜种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.14 小结
  • 3.15 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）对小麦种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.16 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）对白菜种子萌发及幼苗生长的安全性试验
  • 3.17 小结
  • 4 讨论
  • 第二节 增溶剂和助悬剂在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 一、泊洛沙姆188（F-68）在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 1 材料与仪器
  • 2 方法
  • 3 实验结果与分析
  • 3.1 香草醛对小麦的化感活性生物检测
  • 3.2 香草醛对白菜的化感活性生物检测
  • 3.3 阿魏酸对小麦的化感活性生物检测
  • 3.4 阿魏酸对白菜的化感活性生物检测
  • 4 讨论
  • 二、吐温-80（Tween-80）在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 1 材料与仪器
  • 2 方法
  • 3 实验结果与分析
  • 3.1 香草醛对小麦的化感活性生物检测
  • 3.2 香草醛对白菜的化感活性生物检测
  • 3.3 阿魏酸对小麦的化感活性生物检测
  • 3.4 阿魏酸对白菜的化感活性生物检测
  • 4 讨论
  • 三、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 1 材料与仪器
  • 2 方法
  • 3 实验结果与分析
  • 3.1 阿魏酸对小麦的化感活性生物检测
  • 3.2 阿魏酸对白菜的化感活性生物检测
  • 3.3 香草醛对小麦的化感活性生物检测
  • 3.4 香草醛对白菜的化感活性生物检测
  • 4 讨论
  • 第三节 结论
  • 第三章 黄檗果皮化感物质的分离提取和化感活性检测
  • 1 材料与仪器
  • 2 方法
  • 2.1 黄檗果皮挥发油成分的提取
  • 2.2 黄檗果皮90%乙醇粗提
  • 2.3 黄檗果皮90%乙醇粗提物的进一步分离
  • 2.4 95%乙醇组分大孔树脂吸附柱分离
  • 2.5 95%乙醇组分的薄层色谱分析
  • 2.6 95%乙醇组分的硅胶柱色谱分离
  • 2.7 Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离小组分浸膏
  • 2.8 HPLC-ELSD测定95%乙醇组分中所得单体化合物的百分含量
  • 2.9 生物检测
  • 2.10 数据统计分析
  • 3 结果与分析
  • 3.1 黄檗果皮挥发油化感作用的研究
  • 3.2 黄檗果皮90%乙醇粗提物化感作用的研究
  • 3.3 黄檗果皮90%乙醇粗提物中各组分化感作用的研究
  • 3.3.1 正己烷组分化感作用的研究
  • 3.3.2 氯仿组分化感作用的研究
  • 3.3.3 丙酮组分化感作用的研究
  • 3.3.4 95%乙醇组分化感作用的研究
  • 3.3.5 50%乙醇组分化感作用的研究
  • 3.4 95%乙醇组分大孔树脂吸附柱分离
  • 3.5 95%乙醇组分薄层色谱分析以确定硅胶分离条件
  • 3.6 95%乙醇组分硅胶柱色谱分离结果
  • 3.7 分离所得单体化合物的结构鉴定
  • 3.8 Sephadex LH-20凝胶柱色谱结果
  • 3.9 分离所得单体化合物化感作用的研究
  • 3.10 葡萄糖单体对小麦种子的抑制作用
  • 3.11 HPLC-ELSD测定单体化合物在95%乙醇组分浸膏中的百分含量
  • 4 结论
  • 5 讨论
  • 第四章 本文主要研究结果及结论
  • 一、增溶剂和助悬剂在化感生物检测中的安全性研究
  • 二、增溶剂和助悬剂在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 1、泊洛沙姆188（F-68）在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 2、吐温-80（Tween-80）在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 3、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）在脂溶性化感物质生物检测中的应用
  • 三、黄檗果皮化感物质的分离提取和化感活性检测
  • 1、黄檗果皮的化感作用
  • 2、分离得到一个单体化合物
  • 3、HPLC-ELSD测定α—D—葡萄糖在95%乙醇组分母液中的百分含量
  • 参考文献
  • 作者简介
  • 攻读硕士学位期间发表论文情况
  • 致谢
  • 附录
  • 附录1 展开剂配方
  • 附录2 显色剂
  • 附录3 照片
  • 照片1 脂溶性化感物质水溶液（乙醇助溶）中晶体析出现象
  • 照片2 95%乙醇组分大孔树脂吸附柱分离组分对受体种子的化感活性生物检测（7天）
  • 照片3 95%乙醇组分硅胶柱分离薄层硅胶板点板碘缸显色照片
  • 照片4 95%乙醇组分硅胶柱分离所得有化感抑制活性小组分荧光和碘缸显色照片
  • 照片5 不同浓度90%乙醇粗提物对小麦受体种子的化感活性生物检测（7天）
  • 照片6 不同浓度90%乙醇粗提物对白菜受体种子的化感活性生物检测（7天）
  • 照片7 不同浓度95%乙醇组分对小麦受体种子的化感活性生物检测（7天）
  • 照片8 不同浓度95%乙醇组分对白菜受体种子的化感活性生物检测（7天）
  • 照片9 95%乙醇组分硅胶柱色谱有化感活性各小组分预试验结果（7天）
  • 照片10 不同浓度白色结晶对小麦受体种子的化感活性生物检测（7天）
  • 照片11 不同浓度白色结晶对白菜受体种子的化感活性生物检测（7天）
  • 照片12 白色结晶不同浓度下培养的黄檗种子发霉情况（9天）
  • 照片13 葡萄糖单体与分离所得单体化合物生物检测比较（7天）
  • 照片14 单体化合物化学反应鉴定照片
  • 附录4 单体化合物光谱结构鉴定
  • 附录5 HPLC-ELSD色谱图

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