论文摘要
目的研究靶向COX-2ShRNA对大鼠肝纤维化TGF-β1/SMAD信号转导通路的影响，为临床治疗肝纤维化提供新思路。方法SPF级雄性健康SD大鼠50只随机分五组正常组（A组）、模型组（B组）、COX-2ShRNA组（C组）、空载体组（D组）、尼美舒利组（E）。B、C、D、E组根据文献以高脂饮食+40%CCL4花生油灌胃（2ml/kg5d）建立大鼠肝纤维化模型，造模第1周起，C组每只大鼠每天通过尾静脉注射100ul COX-2ShRNA（滴度为1×1010PFU/ml）重组腺病毒载体,进行体内转染；D组注射等量不含COX-2ShRNA基因的重组腺病毒空载体；E组予以尼美舒利（NS）灌胃2ml/kg d；A组、B组给予等量生理盐水；12周末最后一次给药后禁食12h处死大鼠，计算肝湿重及肝指数，检测血清生化指标变化，HE、MASSON染色分析纤维病变程度。RT-PCR、免疫组化法观察大鼠肝组织COX-2、TGF-β1与SMAD1-5的mRNA及蛋白的表达，实验数据用SPSS17.0统计软件对数据进行统计分析。结果1.肝湿重与肝脏指数结果：与A组相比C组大鼠肝湿重与肝指数值明显上升（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠肝湿重及肝指数值明显下降（P＜0.05）。2.血清生化检测结果：与A组相比C组大鼠血清生化指标AST、ALT、TC、TG明显水平上升（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠血清生化指标AST、ALT、TC、TG水平明显下降（P＜0.05）。3.HE、MASSON染色的结果：与A组相比C组大鼠肝肝纤维化病变程度明显加重（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠肝纤维化病变程度明显减轻（P＜0.05）。4.COX-2、TGF-β1及SMAD1-5的RT-PCR定量检测及免疫组织化学法结果：与A组相比C组大鼠肝组织中COX-2、TGF-β1及SMAD1-5的mRNA表达明显上升（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠肝组织中COX-2、TGF-β1及SMAD1-5的mRNA表达明显下降（P＜0.05）。5.COX-2与TGF-β1、SMAD1-5的mRNA表达及蛋白表达的相关性分析：COX-2mRNA表达与TGF-β1、SMAD1-5mRNA表达成正相关。COX-2蛋白表达与TGF-β1、SMAD1-5的蛋白表达成正相关。结论1.COX-2ShRNA可有效降低大鼠肝组织COX-2的表达。2.COX-2ShRNA可能通过抑制肝纤维化大鼠肝组织中COX-2、TGF-β1、SMAD1-5等基因的表达产生抗纤维化作用。