氯沙坦对ox-LDL诱导的人单核巨噬细胞组织因子表达的影响及其机制

论文摘要

研究背景：冠状动脉粥样硬化（AS）斑块由于各种内外因素导致由稳定状态变为不稳定状态,之后发生斑块破裂,激活内外凝血途径,进而冠脉血栓出现,是急性冠脉事件主要的发病机理[1]。目前冠状动脉粥样硬化斑块内血栓形成的机理已逐渐丰富,已经从过去的普遍认为的脂质堆积假说逐渐演变成包括内皮功能受损、组织因子、炎症发应、细胞凋亡等多种因素共同作用的病因学说[2]。组织因子（TF）是凝血瀑布反应中的重要启动因子,正常人生理状态时,与血液接触的细胞并不表达分泌TF,但TF抗原、TF活性和|TFmRNA已被证明存在于粥样斑块中的多种细胞中,包括内皮细胞、血管平滑肌细胞,尤其是富含脂质的泡沫细胞。研究表明在斑块的肩部及无细胞、富含脂质的核心区域中存在大量的TF,而且多数人粥样硬化斑块的凋亡细胞和微粒中高密度区域也表达TF[34]。所有这些证据证明了TF存在于动脉硬化斑块中,说明TF可能对斑块血栓形成能力有馆键的作用[5-6],TF的表达的上升增加动脉血栓的形成的可能及提高动脉斑块由稳定转变成不稳定状态的危险。大多数急性冠脉综合征的患者是由于斑块转变为不稳定状态,TF暴露于血液循环中,激活凝血途径,形成血栓从而导致冠脉的狭窄或堵塞。沙坦类药（血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂,ARB）是与AngⅡ竞争性争夺血管紧张素Ⅱ受体（ATF）,通过阻断Ang Ⅱ和AT1的结合,起到降压、保护靶器官等作用。目前ARB类药物在高血压、冠心病、心力衰竭、糖尿病肾病等治疗中发挥了相当重要的作用。氯沙坦是血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂,相关试验证明,氯沙坦可纠正原发性高血压患者内皮功能的失调及动脉结构的改变。但氯沙坦能否通过LOX-1介导的ox-LDL途径,降低TF的表达,进而减少急性冠脉事件的发生,该方面的研究报道较少。本实验以健康人外周静脉血单核巨噬细胞为实验对象,研究氯沙坦对ox-LDL诱导后单核-巨噬细胞TF表达的影响并研究其可能的机制。目的：研究氯沙坦对ox-LDL诱导人单核-巨噬细胞组织因子（TF）表达的影响及可能的作用机制。研究方法：采用体外密度离心法分离健康人单核细胞培养并传至4代后,以佛波脂（160nmol/ml）诱导为巨噬细胞,培养24h后用于实验。根据实验要求分为空白对照组、ox-LDL组、LOX-1受体阻断剂多聚肌苷酸组（Poly Ⅰ）、氯沙坦组oRT-PCR测各组LOX-1mRNA, TFmRNA的表达状况,ELISA检测各组TF蛋白的表达状况。研究结果：用10×40倍倒置显微镜观察,分离的人单核细胞经培养和佛波酯诱导后,细胞转变为梭形,易聚集贴壁,用流式细胞仪技术做细胞鉴定,结果显示大部分单核细胞已经转变为巨噬细胞,符合本实验要求。氯沙坦对ox-LDL诱导后人单核巨噬细胞LOX-1mRNA和TFmRNA表达作用①对TFmRNA的作用：四实验组之间比较,差异具有统计学意义（P<0.01）; ox-LDL组与空白对照组相比较,TFmRNA的表达显著上升,差异有统计学意义（P<0.01）;Poly I组与ox-LDL组相比较,TFmRNA的表达下调（P<0.01）,且多于空白对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义；氯沙坦组与ox-LDL组比较,TFmRNA的表达下调（P<0.01）,且多于空白对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义。②对LOX-1mRNA的作用：四实验组之间比较,差异具有统计学意义（P<0.01）:Ox-LDL组与空白对照组相比较,LOX-1mRNA的表达明显上升,差异具有统计学意义（P<0.01）；Poly I组与ox-LDL组比较,LOX-1mRNA的表达下调（P=0.027）,且多于空白对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义；氯沙坦组与ox-LDL组相比较,LOX-1mRNA的表达下调（P=0.010）,且多于空白对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义。氯沙坦对ox-LDL诱导的人单核-巨噬细胞TF蛋白表达的作用四实验组之间比较,差异具有统计学意义（P<0.01）; Ox-LDL组与空白对照组相比较,TF的表达明显上升,差异具有统计学意义（P<0.01）; Poly I与ox-LDL组比较,TF的表达下调（P=0.027）,且多于空白对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义；氯沙坦组与ox-LDL组比较,TF的表达下调（P=0.008）,且多于空白对照组（P<0.01）,差异具有统计学意义。LOX-1mRNA和TFmRNA及TF表达之间的相关性分析采用Pearson检验可得出LOX-1mRNA与TFmRNA之间的相关系数.r=0.863P<0.01; LOX-1mRNA与TF之间的相关系数r=0.943p<0.01; TFmRNA与TF之间的相关系数r=0.883p<0.O1。LOX-1mRNA、TFmRNA、TF之间具有正相关性。研究结论：（1） ox-LDL可诱导人单核-巨噬细胞大量表达LOX-1mRNA、TFmRNA及TF蛋白。（2）LOX-1可能通过介导ox-LDL途径诱导人单核-巨噬细胞TF表达增加,与血液接触时可激活外源性凝血途径,进而导致急性冠脉事件的发生。（3）氯沙坦可通过下调人单核-巨噬细胞LOX-1mRNA及TFmRNA的表达,进而下调TF蛋白的表达,以减少血栓的形成的可能,从而减少急性冠脉事件的发生。

论文目录

• 摘要
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• 结论
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• 附图
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