马勃培养特性、总生物碱含量及体外抑菌活性的研究

论文摘要

马勃是较常用的传统药用真菌,广泛分布于世界各地。中国药典（2005年版）收载的马勃主要为脱皮马勃（Lasiosphaera fenzlii Reich）,大马勃[Calvatia gigantean（Batsch ex Pers.）Lloyd]或紫色马勃[C.lilacina（Mont.et Berk.）Lloyd]的干燥子实体。脱皮马勃具有消肿、解毒和止血的功用,临床主要用于治疗呼吸道感染所引起的咽喉肿痛、扁桃体炎、咳嗽等症状,也可外用于治疗疮痈、褥疮、冻疮及创伤出血等。褐孢大秃马勃[C.saccata（Vahl:Fr.）Morg]、黑铅色灰球菌（Bovista nigrescens Pers.）、大口静灰球（Bovistella sinensis Lloyd）和灰包菇[Secotium agaricoides（Czern.）Hollos]这四种腹菌纲真菌在我国部分地区也被作为马勃入药,但尚未被中国药典所收载。据相关文献记载,褐孢大秃马勃幼时可食用;黑铅色灰球菌的孢子粉可作为伤口药使用;大口静灰球和灰包菇与脱皮马勃具有相同的药用功效,特别是大口静灰球在吉林、江苏、湖北、江西、福建等多个省市的众多中医门诊中被广泛地作为马勃入药,用于治疗咳血、创伤出血和扁桃体炎等。我国马勃资源丰富,药用历史悠久,民间和临床使用较广泛,开发利用的潜力巨大,值得对其进一步研究与探讨。本论文对鉴定的灰包菇[Secotium agaricoides（Czern.）Hollos],脱皮马勃（L.fenzlii）,褐孢大秃马勃[C.saccata（Vahl:Fr.）Morg],大口静灰球（Bovistella sinensis Lloyd）和黑铅色灰球菌（Bovista nigrescens Pers.）5种马勃的菌丝体培养特性及体外抑菌活性进行研究,并对大口静灰球子实体的总生物碱进行提取和含量测定,以期为马勃的优质培育与资源开发提供实验依据和理论基础。本实验采用固体培养方法分别研究单因子碳源、氮源、维生素、pH值、温度和光照对以上5种马勃菌丝体固体培养特性的影响,实验结果分别筛选出适合以上5种马勃生长的最佳营养成分和最佳培养条件,根据单因子实验结果设计正交实验L16（45）,筛选出适合灰包菇和大口静灰球菌丝体生长的最佳培养基配方;另外采用液体培养方法对5种马勃液体培养基中碳源、氮源、初始pH值,液体接种量和培养条件进行研究,筛选出适合5种马勃液体发酵的最佳营养成分和最佳培养条件,从而为5种马勃菌种的优质培育和实现其人工栽培提供理论依据。对大口静灰球总生物碱的提取方法进行比较研究,采用酸水提取法提取大口静灰球子实体并收集酸水提取液,经732型阳离子交换树脂吸附总生物碱后,使用732型阳离子交换树脂柱洗脱纯化法、静置提取纯化法、热回流提取纯化法和索氏提取纯化法该树脂进行洗脱纯化,获得较纯的总生物碱,通过称重法和酸性染料比色法对不同提取方法获得的总生物碱含量进行测定。实验结果显示,使用732型阳离子交换树脂柱洗脱纯化法获得的总生物碱最多,总生物碱含量达2.68%,其次依次是热回流提取纯化法获得1.13%、索氏提取纯化法获得0.52%和静置提取纯化法获得0.47%。此外,采用二苯碳酰二肼分光光度法对脱皮马勃孢子粉水提液中Cr6+的含量进行测定,结果显示其中Cr6+含量为0.1206～0.2956mg/L。采用菌饼法（活菌活性测定）和纸片扩散法研究了5种马勃的发酵液、菌丝体水提液、活菌菌饼以及大口静灰球子实体6种溶剂提取液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、黑曲霉和绿色木霉5种测试菌的抑菌活性。实验结果表明这5种马勃的发酵液中都含有与原菌丝体相同或相似的抑菌活性物质。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 化学成分
• 1.2 药理作用
• 1.3 临床应用
• 1.4 培养特性研究
• 第二章 五种马勃的菌种鉴定及其培养
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 灰包菇
• 2.3.2 脱皮马勃
• 2.3.3 褐孢大秃马勃
• 2.3.4 黑铅色灰球菌
• 2.3.5 大口静灰球
• 2.3.6 讨论
• 第三章 五种马勃培养特性的研究
• 3.1 实验材料与仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 五种马勃固体培养特性的研究
• 3.2.2 五种马勃液体培养特性的研究
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 五种马勃固体培养特性研究的结果
• 3.3.2 五种马勃液体培养特性研究的结果
• 3.4 小结与讨论
• 6+含量的测定'>第四章 马勃总生物碱和Cr⁶⁺含量的测定
• 4.1 实验材料与仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 大口静灰球总生物碱提取方法的比较研究
• 4.2.2 酸性染料比色法测定大口静灰球总生物碱的含量
• 6+含量的测定'>4.2.3 脱皮马勃中Cr⁶⁺含量的测定
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 大口静灰球总生物碱提取方法的比较结果
• 4.3.2 酸性染料比色法测定大口静灰球总生物碱含量的实验结果
• 6+含量的测定结果'>4.3.3 脱皮马勃中Cr⁶⁺含量的测定结果
• 4.4 小结与讨论
• 第五章 五种马勃体外抑菌活性的研究
• 5.1 实验材料与仪器
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 大口静灰球子实体6种溶剂提取液抑菌原液的制备
• 5.2.2 五种马勃菌丝体抑菌原液的制备
• 5.2.3 五种马勃发酵液抑菌原液的制备
• 5.2.4 五种马勃活菌菌饼的制备
• 5.2.5 抑菌滤纸片的制备
• 5.2.6 测试菌培养液的制备
• 5.2.7 测试菌平板的制备
• 5.2.8 抑菌操作与观测
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 大口静灰球子实体6种溶剂提取液抑菌实验的结果与分析
• 5.3.2 灰包菇体外抑菌实验的结果与分析
• 5.3.3 脱皮马勃体外抑菌实验的结果与分析
• 5.3.4 褐孢大秃马勃体外抑菌实验的结果与分析
• 5.3.5 黑铅色灰球菌体外抑菌实验的结果与分析
• 5.3.6 大口静灰球体外抑菌实验的结果与分析
• 第六章 结论
• 6.1 五种马勃的菌种鉴定及其培养
• 6.2 五种马勃培养特性的研究
• 6+含量的测定'>6.3 马勃总生物碱和Cr⁶⁺含量的测定
• 6.4 五种马勃体外抑菌活性的研究
• 6.5 本实验创新点
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介