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激活素受体相互作用蛋白1，2在小鼠脑组织中的表达及分布的比较研究

2020-12-07阅读(706)

激活素受体相互作用蛋白1，2在小鼠脑组织中的表达及分布的比较研究

论文摘要

激活素A （Activin A）,属于转化生长因子β（transforming-growth factor-β, TGF-β）超家族成员,又称神经细胞生存分子（nerve cell survival molecule）。本研究在构建激活素特异信号传导蛋白——激活素受体相互作用蛋白1, 2（ARIP1, 2）基因表达载体及制备抗ARIP1, 2抗体的基础上,采用Northern杂交、RT-PCR等分析了ARIP1, 2 mRNA在组织中的表达,发现ARIP1 mRNA在脑、垂体、睾丸、肾上腺组织表达;ARIP2 mRNA则在多种组织表达。免疫组织化学染色显示,在大脑皮质中,ARIP1主要表达在小细胞神经元,而ARIP2主要表达在大细胞神经元;在海马和下丘脑神经元、脉络膜、垂体及小脑浦肯野细胞ARIP1和ARIP2共表达。小鼠脑神经瘤细胞系Neuro-2a细胞也表达ARIP1和ARIP2,Activin A刺激Neuro-2a细胞24h后,ARIP1表达减弱,而ARIP2表达增强;LPS可促进ARIP1, 2表达。在Neuro-2a细胞ARIP1, 2过表达均能抑制Activin A诱导的特异基因转录,ARIP1还能抑制Smad3诱导的基因转录。Neuro-2a细胞稳定转染ARIP1基因表达质粒可以显著减弱Activin A诱导的INa,而ARIP2对Activin A诱导的INa无明显影响。ARIP1基因过表达对Neuro-2a细胞增殖也有明显的抑制作用,ARIP2基因过表达对增殖无明显影响。在急性机械性脑损伤模型鼠脑组织中Activin A mRNA表达水平增高,而ARIP1表达减少,可能更有利于Activin A发挥神经保护作用。综上所述,本研究结果显示,作为激活素信号传导的抑制蛋白,ARIP1, 2在组织中的表达及其生物学活性均存在差异,ARIP1, 2可能是决定Activin A在神经细胞作用的关键信号传导分子。

论文目录

  • 提要
  • 英文词表
  • 第1章 文献回顾
  • 1.1 Activin 及其信号传导
  • 1.1.1 Activin 及其受体
  • 1.1.2 受体下游的信号分子—Smad
  • 1.1.3 由Smad 介导的细胞内信号传导通路
  • 1.1.4 Activin 受体相互作用蛋白及其在Activin 信号传导中的作用
  • 1.2 Activin 的生理功能及其临床意义
  • 1.2.1 Activin 在机体不同组织器官的作用
  • 1.2.2 Activin 与炎症和机体急性期反应的关系
  • 1.2.3 Activin 在病理创伤中的作用
  • 1.3 脑损伤
  • 1.3.1 病理生理概述
  • 1.3.2 损伤后内源性脑损伤因子的变化
  • 1.4 Activin 与神经组织损伤重建
  • 1.4.1 Activin 在神经组织中的分布
  • 1.4.2 Activin 与突触重塑
  • 第2章 材料与方法
  • 2.1 实验动物
  • 2.2 主要试剂
  • 2.3 主要仪器
  • 2.4 试剂配制
  • 2.5 主要方法
  • 2.5.1 质粒构建
  • 2.5.2 GST-ARIP1C/2C 融合蛋白表达及抗 ARIP1/2 抗体制备
  • 2.5.3 抗ARIP1, 2 多克隆抗体交叉反应测定
  • 2.5.4 ARIP1, 2 mRNA 和蛋白的组织分布比较
  • 2.5.5 Neuro-2a 中ARIP1, 2 mRNA 和蛋白表达
  • 2.5.6 ARIP1, 2 介导的Activin 特异基因转录活性分析
  • 2.5.7 电生理学实验
  • 2.5.8 MTT 检测ARIP1, 2 过表达对Neuro-2a 细胞增殖的影响
  • 2.5.9 小鼠急性机械性脑损伤组织中ARIP1, 2 及Activin A 表达变化
  • 第3章 结果
  • 3.1 ARIP1, 2 抗体的交叉反应试验
  • 3.2 ARIP1, 2 在小鼠组织中的表达分析
  • 3.2.1 Northern 杂交分析ARIP1, 2 mRNA 在小鼠组织中的表达
  • 3.2.2 RT-PCR 分析ARIP1, 2 mRNA 在小鼠多种组织中的表达情况
  • 3.2.3 免疫组化染色比较ARIP1, 2 蛋白在小鼠脑组织中的分布
  • 3.3 ARIP1, 2 在Neuro-2a 中的表达分析
  • 3.3.1 RT-PCR 分析ARIP1, 2 在Neuro-2a 中的表达
  • 3.3.2 免疫组化染色分析ARIP1, 2 蛋白在Neuro-2a 中的表达
  • 3.3.3 Activin 特异基因转录活性分析
  • 3.3.4 ARIP1, 2 基因过表达对Neuro-2a 细胞增殖的影响
  • +电流影响'>3.4 ARIP1, 2 对Activin A 诱导Neuro-2a Na+电流影响
  • +通道电流的作用'>3.4.1 ARIP1 对Activin A 诱导Neuro-2a 细胞Na+通道电流的作用
  • +通道电流的作用'>3.4.2 ARIP2 对Activin A 诱导Neuro-2a 细胞Na+通道电流的作用
  • 3.5 急性机械性脑损伤模型小鼠脑组织中ARIP1, 2 和Activin A mRNA 和蛋白的表达变化
  • 3.5.1 小鼠脑损伤组织形态学检测
  • 3.5.2 荧光定量PCR 检测模型鼠脑组织中ARIP1, 2、Activin A和ActRIIA mRNA 表达水平
  • 3.5.3 免疫组织化学染色检测ARIP1, 2 成熟蛋白在模型鼠脑组织中的表达
  • 第4章 讨论
  • 4.1 ARIPs 基因结构比较
  • 4.2 ARIP1, 2 组织学分布的比较
  • 4.3 ARIP1, 2 在Activin 信号传导中的意义
  • 4.4 ARIP1, 2 在神经损伤修复过程中的意义
  • 结论
  • 参考文献
  • 攻读博士期间主要学术成果
  • 致谢
  • 中文摘要
  • ABSTRACT

    • 相关论文文献

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