青霉素类抗生素残留分析的前处理及HPCE检测方法研究

论文摘要

青霉素类抗生素广谱高效,药物学性质良好,且几乎没有毒性,在畜牧兽医领域也得到了广泛的应用,被大量应用于动物疾病预防与治疗,由于部分养殖单位不合理用药导致残留现象严重,人类食用此类存在青霉素类抗生素残留的动物源性产品会对身体造成一定危害甚至产生严重过敏反应,所以对动物源性食品中此类抗生素残留的有效监测已经成为保障食品安全的一个重要环节。为了适应残留检测的需要,建立灵敏度、准确度和精确度均符合残留检测要求的青霉素类抗生素残留分析方法成为研究的重点。本实验结合国内外对青霉素类抗生素的药理研究及残留分析方法的研究,建立了分析青霉素类抗生素中青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林三种药物的良好前处理方法及毛细管电泳分离分析方法。本实验开展了以下研究工作:1.鸡肌肉组织中青霉素类抗生素残留分析的四种前处理方法的建立与比较本实验建立了鸡肌肉组织中青霉素类抗生素残留分析的四种前处理方法,并通过实验数据分析比较确定出最优的鸡肌肉组织中青霉素类抗生素残留分析前处理方法,为本课题的后续研究提供实验基础。本实验建立了溶剂提取、固相萃取、基质固相分散萃取、基质固相分散萃取—固相萃取联用四种前处理方法,对所得数据及图谱进行分析发现,相比之下固相萃取法具有回收率水平较高、图谱背景干扰小的特点,可满足残留分析的要求,且此法操作简单,鸡肌肉组织中的三种青霉素类抗生素直接采用磷酸盐缓冲液提取,乙腈去蛋白,然后使用C18固相萃取柱净化,80%乙腈洗脱,洗脱液40℃高纯氮气吹干,微孔滤膜过滤后即可使用仪器检测。故最终确定固相萃取法为处理鸡肌肉组织样品的前处理方法。2.高效毛细管电泳分离青霉素类抗生素方法建立实验首先对几种缓冲体系进行比较,硼砂/盐酸缓冲体系可对青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林进行较好分离,确定为实验所需缓冲体系。通过紫外扫描确定198nm为检测波长。然后通过四因素三水平正交实验,分别对不同的缓冲液离子浓度、pH值、分离电压和运行温度对青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林分离效果的影响进行分析,结果表明缓冲液离子浓度为30mmom/L、pH为7.8、分离电压为18 kV、运行温度为25℃为最佳电泳条件。最终采用的毛细管电泳分析条件为:弹性石英毛细管柱（75gm×50cm）,二极管阵列检测器（PDA）,0.6psi进样8s,检测波长198nm,运行缓冲液为30mmol/L硼砂缓冲液,pH值7.8（6mol/LHCL调）,分离电压18kV,温度25℃。每次进样前均0.1mol/LNaOH洗2min、水洗3min、缓冲液洗5min。在确定的最佳电泳条件下青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林完全分离且峰形较佳。3.SPE—HPCE分析鸡肌肉样品中的青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林残留方法建立实际鸡肌肉样品采用磷酸盐缓冲液提取、乙腈去蛋白、正己烷脱脂、SPE净化后HPCE检测,对实验数据进行分析,结果显示,SPE—HPCE方法下青霉素的检测限为0.2μg/g定量限为0.5μg/g,氨苄青霉素的检测限为0.3μg/g定量限为0.7μg/g,阿莫西林的检测限为0.1μg/g定量限为0.3μg/g。三者在鸡肌肉组织中的回收率范围为77.7%～95.1%,变异系数CV范围为4%～12%。色谱图背景简单,无干扰药物分离的杂质峰出现。目前青霉素类抗生素的仪器检测方法报道的多为高效液相色谱法,毛细管电泳方法检测鸡肌肉组织中残留的青霉素类抗生素的报道国内外均不多见,本研究还在对四种前处理方法进行建立与比较后选出最优前处理方法,为本课题后续研究提供了理论与实验基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 插图和附表清单
• 中英文词汇对照表
• 文献综述
• 1.青霉素类抗生素概述
• 2.青霉素类抗生素残留分析的意义
• 3.青霉素类抗生素前处理方法研究进展
• 4.青霉素类抗生素仪器分析方法研究进展
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料与设备
• 2.1.1 实验样品
• 2.1.2 标准品
• 2.1.3 试剂及材料
• 2.1.4 仪器设备
• 2.2 溶液配制
• 2.2.1 标准品溶液
• 2.2.2 缓冲液和洗脱剂
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 三种青霉素类抗生素HPCE分离条件的选择与优化
• 2.3.2 样品前处理方法比较
• 2.4 分析方法评价指标
• 3 结果与分析
• 3.1 高效毛细管电泳方法的建立
• 3.1.1 色谱条件确立
• 3.1.2 标准曲线与线性范围测定
• 3.1.3 精密度测定
• 3.1.4 PENs标准品（对照品）的毛细管电泳色谱图
• 3.2 样品前处理的溶剂提取方法建立
• 3.2.1 提取剂选择
• 3.2.2 分析方法指标实验
• 3.2.3 溶剂提取-HPCE色谱图
• 3.3 样品前处理的SPE方法建立
• 3.3.1 淋洗剂与洗脱剂的选择
• 3.3.2 分析方法指标实验
• 3.3.3 SPE-HPCE色谱图
• 3.4 样品前处理的MSPD方法建立
• 18填料用量的确定'>3.4.1 C₁₈填料用量的确定
• 3.4.2 淋洗剂与洗脱剂的选择
• 3.4.3 分析方法指标实验
• 3.4.4 MSPD-HPCE色谱图
• 3.5 样品前处理的MSPD-SPE方法建立
• 3.5.1 分析方法指标实验
• 3.5.2 MSPD-SPE-HPCE色谱图
• 3.6 青霉素类抗生素多残留组织样品四种前处理方法比较
• 3.7 青霉素类抗生素多残留组织样品的检测
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介