天府肉鸭脾脏生长发育及细胞增殖与凋亡的研究

论文摘要

选用天府肉鸭130只。分26个组,其中胚胎期13个组即：16-28天胚龄（D）,每一胚龄为一组；胚后期13个组即：OW（新生雏）、1W,2W,3W,4W,5W, 8W,11W,14W,17W,20W,23W,32W。运用形态计量法,光镜、免疫组织化学染色、末端脱氧核糖核酸转移酶标记（TUNEL）、原位杂交等技术对天府肉鸭脾脏胚胎及胚后期宏观生长指标,组织结构、淋巴细胞增殖与凋亡进行动态观察与研究。结果如下：脾脏胚胎及胚后期发育的形态组织结构表现出明显增龄变化特性。即胚胎期16-23D为缓慢发育期,23-28D为快速发育期；胚后期0-14W为继续发育期（其中0-8W为快速生长期,8-14W为缓慢生长期）,14-32W为成熟持续期。胚胎期脾脏白、红髓淋巴细胞凋亡率呈上升趋势（16-27D）。胚后期脾小结淋巴细胞凋亡率呈现上升（0-4W）,下降（4-11W）,上升（11-20W）,下降（20-32W）的变化规律。动脉周围淋巴鞘（Periarterial lymphatic sheath,PALS）淋巴细胞凋亡率在0-32W保持上升趋势。红髓呈现上升（0-11W）后下降（11-32W）的变化趋势。胚胎期脾脏白、红髓淋巴细胞增殖率呈增长趋势。胚后期脾小结淋巴细胞增殖率0-4W下降,4-20W恒定,20-32W逐渐下降。红髓与PALS淋巴细胞增殖率0-32W呈下降趋势。在脾脏胚胎及胚后期发育中淋巴细胞Bcl-2阳性率与其凋亡率之间呈反向变化关系（胚胎期红髓19-23D,胚后期脾小结0-1W、11-20W,红髓20-32W除外）。淋巴细胞Bax蛋白在脾脏胚胎及胚后期发育中的表达和其淋巴细胞凋亡率变化规律一致（胚胎期红髓19-23D,胚后期脾小结4-20W, PALS0～1W、4-11W、20-32W,红髓1-4W除外）。在脾脏胚胎及胚后期发育中淋巴细胞Bcl-2/Bax比值与其凋亡率之间呈反向变化关系（胚后期脾小结11-20W,红髓1-4W除外）。脾脏胚胎期发育过程中,白、红髓淋巴细胞Bcl-2和Bax mRNA阳性率均与淋巴细胞Bcl-2和Bax蛋白阳性率的变化规律相似；两种基因与其蛋白在组织中的分布基本一致,提示其表达涉及转录水平调控。胚后期PALS和红髓淋巴细胞Bcl-2mRNA阳性率与淋巴细胞Bcl-2蛋白阳性率的变化规律基本一致；脾小结、PALS和红髓淋巴细胞Bax mRNA阳性率与其蛋白阳性率的变化规律基本相同（脾小结0-11W和20-32W除外）；两种基因与其蛋白在组织中的分布不同,提示其表达存在转录后调控。本研究表明：天府肉鸭脾脏胚胎及胚后期发育过程中宏观生长指标、组织结构、细胞增殖与凋亡、凋亡蛋白与基因表达呈现明显的增龄变化特性。细胞凋亡和增殖共同调节脾脏内T、B淋巴细胞的增殖、分化、成熟与死亡,并且参与鸭脾脏生长发育的调控；凋亡因子Bcl-2和Bax蛋白及其基因的表达直接调控脾脏淋巴细胞的凋亡。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1. 脾脏的结构
• 1.1 宏观结构
• 1.2 组织结构
• 1.2.1 间质
• 1.2.2 实质
• 2 脾脏的发育
• 3 脾脏细胞的增殖与凋亡
• 3.1 增殖
• 3.2 凋亡
• 4 脾脏细胞部分凋亡基因及蛋白的表达
• 4.1 Bcl-2和Bax
• 4.2 Caspase-3
• 4.3 Fas/FasL
• 4.4 P53
• 立题依据及研究意义
• 1 立题依据
• 2 研究内容
• 3. 研究意义
• 实验一 天府肉鸭脾脏胚胎及胚后期发育的形态组织学研究
• 1 材料
• 1.1 试验动物与分组
• 1.2 试剂和仪器
• 1.3 方法
• 1.3.1 体重
• 1.3.2 宏观生长指标的测定
• 1.3.3 组织标本的制备
• 1.4 数据处理
• 2 结果
• 2.1 脾脏宏观生长指标测定
• 2.1.1 胚胎期
• 2.1.2 胚后期
• 2.1.3 宏观生长指标回归模型的拟合
• 2.2 脾脏发育的显微结构
• 2.2.1 胚胎期
• 2.2.2 胚后期
• 3 讨论
• 3.1 脾脏发育宏观生长指标的变化
• 3.2 脾脏发育宏观指标回归模型分析
• 3.3 脾脏发育的组织学变化
• 3.4 天府肉鸭脾脏发育与其他禽类的异同
• 3.5 天府肉鸭脾脏发育与中枢免疫器官发育的异同
• 实验二.天府肉鸭脾脏胚胎及胚后期发育期细胞凋亡与增殖的研究
• 1. 材料和方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要仪器
• 1.3 组织标本
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 TUNEL染色法
• 1.4.2 SABC免疫组化方法检测增殖细胞核抗原
• 1.5 定量分析和统计学处理
• 2. 结果
• 2.1 TUNEL检测结果
• 2.2 SABC免疫组织化学染色结果
• 3 讨论
• 3.1 脾脏淋巴细胞的凋亡
• 3.1.1 胚胎期淋巴细胞凋亡
• 3.1.2 胚后期淋巴细胞凋亡
• 3.1.3 天府肉鸭脾脏淋巴细胞凋亡与其他禽类比较
• 3.2 脾脏淋巴细胞的增殖
• 3.2.1 胚胎期脾脏淋巴细胞增殖
• 3.2.2 胚后期脾脏淋巴细胞增殖
• 3.2.3 天府肉鸭脾脏淋巴细胞增殖与其他禽类比较
• 3.3 脾脏淋巴细胞增殖与凋亡的关系
• 3.4 天府肉鸭脾脏增殖与凋亡与中枢免疫器官的异同
• 实验三 天府肉鸭脾脏胚胎及胚后期发育期凋亡蛋白Bcl-2和Bax及其基因表达的研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 SABC免疫组化方法检测凋亡蛋白
• 1.3.2 原位杂交检测Bcl-2和Bax mRNA
• 1.4 定量分析和统计学处理
• 2. 结果
• 2.1 SABC免疫组化染色
• 2.1.1 胚胎期脾脏Bcl-2及Bax蛋白的表达及Bcl-2/Bax比值
• 2.1.2 胚后期脾脏Bcl-2及Bax蛋白的表达及Bcl-2/Bax比值
• 2.1.3 淋巴细胞凋亡蛋白阳性率与凋亡率的关系
• 2.2. Bcl-2和BaxmRNA原位杂交
• 2.2.1 胚胎期脾脏Bd-2及Bax mRNA的表达
• 2.2.2 胚后期脾脏Bcl-2及Bax mRNA的表达
• 2.3 淋巴细胞Bcl-2和Bax mRNA阳性率与其蛋白阳性率的关系
• 3 讨论
• 3.1 脾脏发育期Bcl-2和bax蛋白的表达
• 3.1.1 Bcl-2
• 3.1.2 Bax
• 3.1.3 Bcl-2/Bax
• 3.2 脾脏胚胎及胚后期发育期Bcl-2mRNA和BaxmRNA的表达
• 3.2.1 Bcl-2 mRNA
• 3.2.2 Bax mRNA
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 图版