利用脂肪酸合酶作为靶标筛选抗癌植物活性物质

论文摘要

为了从植物材料中筛选有抗癌活性的物质,我们选择了肿瘤中普遍高表达的脂肪酸合酶(FAS)为靶标。本研究应用分光光度法检测了11种肿瘤细胞包括食管癌胃癌、肺癌、肝癌和白血病等细胞中的FAS的活性,从中选择FAS活性高的细胞株,作为筛选脂肪酸合酶抑制剂的模式细胞来。实验选取了广东东部常见的四种植物材料:橄榄(Canarium album)叶、木棉(Bombax malabarica)花、芥蓝(Brassica alboglabra )和潮州柑(Citrus poonensis)果皮,进行植物总黄酮的提取,并用植物总黄酮提取物对模型细胞中FAS进行抑制实验。我们根据FAS抑制实验检结果选择对FAS抑制效果最好的两种植物总黄酮提取物作用于培养的食管癌细胞用于检测它们对细胞增殖的影响。同时我们的研究针对潮汕地区高发的食管癌疾病,选取了48例临床食管癌组织标本,探究食管癌组织和对应的癌旁正常食管组织中FAS活性的差异。实验结果显示各种肿瘤细胞的FAS活性存在明显差异,以胃癌细胞N87为最低,仅为15.91±3.61U/mg蛋白,而肺癌细胞A549活性最高,达到127.36±10.14U/mg蛋白。因此本实验以A549为模型细胞。FAS抑制实验的结果显示潮州柑果皮总黄酮提取物和橄榄叶总黄酮提取物对脂肪酸合酶的抑制效果明显优于通用的FAS抑制剂C75。用筛选到的植物总黄酮提取物作用于食管癌细胞H5E973,发现它们明显地抑制了细胞的增殖。但不像通用的FAS抑制剂C75和黄酮纯品Morin那样引起细胞形态的变化。临床食管癌样本中FAS的活性情况的统计结果显示FAS的活性在食管癌组织和正常食管组织中的差异不显著。这提示我们在食管癌中,癌细胞可能是通过FAS量的改变而不是FAS活性的改变来适应细胞对脂质的需求。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 学术背景
• 1.1.1 脂肪酸合酶（FAS）的作用
• 1.1.2 FAS的基因结构
• 1.1.3 FAS与肿瘤的关系
• 1.1.4 植物活性物质与FAS抑制剂
• 1.1.5 抗癌药物筛选策略的发展
• 1.2 本研究的理论与实际意义及本研究课题的来源
• 1.3 国内外研究境况
• 1.3.1 FAS在肿瘤组织和正常组织中的表达情况
• 1.3.2 FAS与肿瘤的相关性
• 1.3.3 FAS抑制剂对肿瘤的影响
• 1.3.4 对FAS有作用的物质的研究
• 1.3.5 FAS的调控
• 1.4 本课题主要研究内容
• 第二章 FAS 活性测试
• 2.1 酶活性测试的原理
• 2.2 酶活性测试
• 2.2.1 试剂的准备
• 2.2.2 实验酶样品的准备
• 2.2.3 蛋白含量的检测
• 2.2.4 活性测试步骤
• 2.3 FAS 活力测试预实验
• 2.3.1 酶催化反应底物的质量评估
• 2.3.2 FAS溶液的准备
• 2.3.3 FAS活力测试
• 2.3.4 FAS 活力测试预实验的评价
• 第三章 不同肿瘤细胞中FAS的活性情况
• 3.1 细胞培养
• 3.1.1 细胞培养准备工作
• 3.1.2 细胞培养操作
• 3.2 不同肿瘤细胞中FAS活性的检测
• 3.2.1 实验操作
• 3.2.2 实验结果
• 3.2.3 结果分析
• 第四章 植物材料的选择和黄酮提取
• 4.1 植物的选择
• 4.1.1 植物材料选择采用的标准
• 4.1.2 选取植物材料的功效及选择原因
• 4.1.3 选取植物中黄酮作为研究对象的原因
• 4.2 实验方法和结果
• 4.2.1 植物总黄酮提取
• 4.2.2 亚硝酸钠－硝酸铝法检测黄酮含量
• 第五章 植物总黄酮提取物对肿瘤细胞FAS活性的影响
• 5.1 实验操作
• 5.1.1 从肿瘤细胞A549 中获取FAS
• 5.1.2 植物提取物与FAS相互作用时间的确定
• 5.1.3 植物提取物样品的准备
• 5.1.4 FAS抑制实验
• 5.1.5 MTT实验
• 5.2 实验结果和讨论
• 5.2.1 FAS的准备
• 5.2.2 植物提取物与FAS相互作用时间的确定
• 5.2.3 FAS抑制实验
• 5.2.4 MTT实验
• 5.2.5 显微拍照显示提取物对癌细胞的作用
• 第六章 食管癌样品中FAS活性的情况
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 组织中脂肪酸合酶样品的制备
• 6.1.3 蛋白含量测定
• 6.1.4 FAS 活性测定
• 6.1.5 统计学方法
• 6.2 结果
• 6.2.1 食管癌组织和癌旁正常组织中FAS的相对活性
• 6.2.2 食管癌中FAS的相对活性与临床参数的关系
• 6.3 讨论
• 实验总结
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文情况