论文摘要
肺癌是临床最常见的恶性肿瘤,发病率逐年上升,也是国内外死亡率最高的恶性肿瘤。目前肺癌早期最有效的治疗方法仍然是手术,但患者在根治性切除术后相当一部分仍死于肺癌的复发转移。对于肿瘤防治机制的研究,既往大部分的研究方向和治疗手段均集中于肿瘤细胞的干预上,目前国内外诸多研究已证明肿瘤炎性微环境可影响肿瘤细胞的转移潜能和转移靶向。肺瘤平膏是由中国中医科学院广安门医院研制的临床防治肺癌复发转移具有确切疗效的成药,既往大量临床试验发现,肺瘤平膏可改善患者生活质量,延长瘤体稳定时间,尤其可以改善气阴两虚型肺癌患者的症状。大量的基础实验亦发现肺瘤平膏可以显著改善免疫功能；我们前期的动物实验表明肺瘤平膏可降低Lewis肺癌荷瘤小鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6的含量,并且可以显著降低瘤体中NF-κB、snail及MMP-9的表达,同时,肺瘤平膏可以增加E-cadhrein的表达而降低N-cadhrein。基于前期的工作基础,我们进一步进行了体外实验。目的：1)发现炎症在肿瘤微环境中的重要作用和其对肺癌转移的影响；2)揭示肺瘤平膏调控肿瘤炎性微环境炎性信号通路影响肺癌转移的分子机制。方法：1)制备肺瘤平膏含药血清,通过MTT（?）观察肺瘤平膏不同剂量对A549细胞增殖的影响；2)建立A549细胞与巨噬细胞的共培养体系,观察炎性环境对A549细胞形态的影响及肺瘤平膏的干预作用；3)通过细胞划痕实验和Transwell实验观察肺瘤平膏对共培养条件下A549细胞迁移能力的影响；4)通过Transwell实验观察肺瘤平膏对共培养条件下A549细胞侵袭能力的影响；5)通过ELISA法检测肺瘤平膏对共培养上清液TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β1、 MMP-2、MMP-9和uPA浓度的影响；6)通过荧光定量PCR法观察肺瘤平膏对共培养条件下A549细胞NF-κB通路相关基因和EMT相关基因mRNA表达量的影响；7)通过Western blot观察肺瘤平膏对共培养条件下A549细胞NF-κB通路相关蛋白和EMT相关蛋白表达量的影响；8)通过核转位实验观察肺瘤平膏对共培养条件下A549细胞NF-κB核转位的影响；9)通过免疫荧光法观察肺瘤平膏对共培养条件下A549细胞中E-cadherin、 N-cadherin、Vimentin、ZO-1、MMP-2和MMP-9定位和表达量的影响；10)通过明胶酶谱法观察肺瘤平膏对共培养上清液中MMP-2和MMP-9活性的影响。结果：1)各含药血清组均在药物干预24h后出现抑制作用,48h后抑制作用最强,72h后抑制率又有所下降。肺瘤平膏含药血清中,以肺瘤平膏中剂量组干预48h后抑制细胞增殖作用最强。2)共培养条件下A549细胞变成间充质细胞样,而加入肺瘤平膏含药血清组,部分A549细胞形态恢复上皮细胞样。3)细胞划痕实验中：普通培养基条件下,除CTX组,其余各剂量肺瘤平膏含药血清组细胞迁移距离均较空白组明显缩短,有显著性差异（P<0.05）；其中肺瘤平膏中剂量组距离最短。在条件培养基共培养条件下,肺瘤平膏中剂量和高剂量组细胞迁移距离均较空白组明显缩短,有显著性差异（P<0.05）；其中肺瘤平膏中剂量组距离最短。4) Transwell迁移实验结果表明,与空白组相比较,除CTX组外,各剂量组肺瘤平膏含药血清均能降低共培养条件下A549细胞迁移细胞数,有显著性差异（P<0.05）；其中肺瘤平中剂量组迁移数量最少。5) Transwell侵袭实验结果表明,与空白组相比较,各组含药血清均能降低共培养条件下A549细胞侵袭能力,有显著性差异（P<0.05）；其中肺瘤平膏中剂量组侵袭数量最少。6) ELISA结果表明,共培养后,TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β1的浓度均明显升高,而肺瘤平膏可以降低24h后TNF-α的浓度（P<0.05）,对其他3个因子没有影响（P>0.05）。7)共培养条件下A549细胞中CHUK、IKBKB、NFKBIA、RelA这4个基因的mRNA表达量均明显升高,有显著性差异（P<0.05）；肺瘤平膏含药血清干预后,CHUK、KBKB、Re1A表达量均显著降低（P<0.05）,NFKBIA表达量显著升高（P<0.05）。8)共培养条件下,A549细胞总蛋白中NF-kB p65、p-IKKα/β、 p-IκBa的表达量升高（P<0.05）,IKKβ、IκBa的表达量降低（P<0.05）,IKKa表达量无明显变化；肺瘤平膏干预后可降低IKKα、p-IKKα/β、p-lKBa的表达量（P<0.05）,升高IκBα的表达量（P<0.05）,对IKKβ和NF-κB p65的表达量无明显影响。胞浆和胞核蛋白中p-NF-κB p65的含量在共培养组亦明显升高（P<0.05）,而肺瘤平膏干预后可降低此二者的表达量（P<0.05）,并且降低其胞核/胞浆比例。9) NF-κB p65核转位实验结果显示,共培养组核转位明显（P<0.05）；肺瘤平膏干预后,显著下降（P<0.05）；A549+空白血清+TNF-a组核转位率与A549+空白血清组相比有显著性差异（P<0.05）；加用BAY11-7082后,与A549+空白血清+TNF-a组相比较,核转位率明显下调（P<0.05）；而共培养+BAY11-7082与共培养+空白血清组相比,亦能显著下调核转位率（P<0.05）。10)共培养条件下,A549细胞中SNAIL1、ZEB1、CTNNB1、FLRT1、CDH2、VIM基因mRNA表达上调（P<0.05）,TJP1基因mRNA表达下调（P<0.05）,SNAIL2、CDH1、CLDN1无明显变化；肺瘤平膏干预后,可上调SNAIL2、TJP1、CLDN1、CDH1、VIM基因mRNA的表达（P<0.05）,下调CTNNB1、FLRT1、CDH2基因nRNA的表达（P<0.05）,对SNAIL1和ZEB1基因mRNA无明显影响。11)共培养条件下,A549细胞中Snail、N-cadherin、Vimentin蛋白表达量上调（P<0.05）,而E-cadherin蛋白表达量下调（P<0.05）,Slug、ZEB1蛋白无明显变化；肺瘤平膏干预后可以上调E-cadherin蛋白表达量（P<0.05）,下调Snail、N-cadherin、Vimentin蛋白表达量（P<0.05）。12)免疫荧光结果显示,E-cadherin表达细胞膜和胞浆内,绝大部分以细胞膜为主；N-cadherin表达于细胞膜和胞浆内,绝大部分以细胞浆为主；Vimentin表达胞浆内；ZO=1表达于细胞连接处为主,部分细胞膜染色亦呈阳性。共培养和肺瘤平膏干预下,E-cadherin、 N-cadherin和Vimentin表达量变化同Western blot结果,ZO-1表达量前后无明显变化。13)共培养条件下A549细胞中MMP-2、MMP-9、PLAU的mRNA表达量显著升高（P<0.05）；肺瘤平膏含药血清干预后,其表达量均显著降低（P<0.05）。14)共培养条件下A549细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达量显著升高（P<0.05）；肺瘤平膏含药血清干预后,其表达量均显著降低（P<0.05）。15)共培养上清液中MMP-2、MMP-9、uPA的浓度均随时间逐渐升高,肺瘤平膏可以降低上清液中24h后uPA的浓度（P<0.05）,而对MMP-2、MMP-9的浓度无明显影响（P>0.05）。16)共培养上清液中,MMP-2、MMP-9的活性均明显升高,而肺瘤平膏对其活性无明显影响（P>0.05）。结论：1)肺瘤平膏可以在一定程度上抑制A549细胞的增殖；2)肺瘤平膏可以抑制共培养条件下A549细胞的侵袭和迁移能力；3)肺瘤平膏可以降低共培养条件下TNF-α的含量,从而抑制其诱导的NF-κB通路的激活,转位入核并诱导的上皮间质转化的形成；4)肺瘤平膏可以降低共培养条件下A549细胞中MMP-2和MMP-9的含量及上清液中uPA的含量,但不能降低上清液中MMP-2和MMP-9的含量和活性。
论文目录
相关论文文献
- [1].NF-κB在膝关节骨性关节炎治疗中的应用研究进展[J]. 按摩与康复医学 2015(12)
- [2].外周血单个核细胞NF-κB活性与急性缺血性脑卒中的相关性研究[J]. 心脑血管病防治 2019(06)
- [3].中药阻断NF-κB信号通路抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒感染的研究进展[J]. 中国医药导报 2020(01)
- [4].蛋白酶体抑制剂通过NF-κB通路对急性肾损伤的保护作用[J]. 临床泌尿外科杂志 2020(01)
- [5].NF-κB在糖尿病视网膜病变中的研究进展[J]. 中医临床研究 2020(07)
- [6].NF-κB信号通路在人羊膜间充质干细胞治疗宫腔粘连中的作用[J]. 第三军医大学学报 2020(11)
- [7].金黄色葡萄球菌通过NF-κB信号对破骨细胞分化的影响及作用[J]. 基因组学与应用生物学 2020(04)
- [8].香兰素通过NF-κB信号通路抑制巨噬细胞活化的作用研究[J]. 黑龙江八一农垦大学学报 2020(04)
- [9].冬凌草甲素抑制T细胞核因子κB(NF-κB)通路减轻小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎症状[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2020(06)
- [10].NF-κB介导的炎症通路与消化道肿瘤相关研究进展[J]. 智慧健康 2020(24)
- [11].NF-κB信号通路与前列腺炎、前列腺癌形成的关系[J]. 中国药学杂志 2020(20)
- [12].NF-κB和EGFR在前列腺癌中的表达及临床意义[J]. 江西医药 2016(12)
- [13].NF-κB对大肠癌发生发展的影响及其相关治疗的研究现状[J]. 实用肿瘤学杂志 2017(01)
- [14].硼替佐米对人脐动脉血管平滑肌细胞NF-κB的影响[J]. 医学研究杂志 2017(01)
- [15].NF-κB对非酒精性脂肪性肝病发病过程的影响[J]. 中南大学学报(医学版) 2017(04)
- [16].NF-κB与肝脏缺血再灌注损伤的研究进展[J]. 中国现代普通外科进展 2017(04)
- [17].NF-κB、HIF-1α及其在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征中的研究进展[J]. 贵州医药 2017(06)
- [18].NF-κB信号通路在乳腺癌发生及发展中作用的研究进展[J]. 同济大学学报(医学版) 2017(03)
- [19].染料木黄酮对氨诱导的星形胶质细胞NF-κB活化的影响[J]. 中国病理生理杂志 2017(09)
- [20].NF-κB参与调控细胞凋亡[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2017(10)
- [21].紫菀酮基于NF-κB信号通路的体外抗炎机制研究[J]. 中华中医药杂志 2016(04)
- [22].二冬膏抗NF-κB抑制介导的人肺癌细胞效应探讨[J]. 中国实验方剂学杂志 2016(08)
- [23].NF-κB在初治急性髓系白血病中的表达与意义[J]. 江西医药 2016(08)
- [24].狼疮肾炎患者外周血单个核细胞NF-κB的表达及其意义[J]. 中国麻风皮肤病杂志 2009(04)
- [25].急性期川崎病患儿外周血单个核细胞NF-κB、MMP-9表达变化及意义[J]. 山东医药 2015(06)
- [26].NF-κB在细胞凋亡中调节作用的研究进展[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2015(02)
- [27].益气活血方对糖尿病肾病大鼠肾组织中NF-κB表达的影响[J]. 中药药理与临床 2015(02)
- [28].胎盘早剥患者外周血单个核细胞中NF-κB的表达研究[J]. 同济大学学报(医学版) 2015(02)
- [29].NF-κB与多发性骨髓瘤[J]. 南通大学学报(医学版) 2015(03)
- [30].NF-κB在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义[J]. 微生物学杂志 2015(03)