论文摘要
目的观察吡格列酮培养的前脂肪细胞增殖和分化情况,检测细胞上清液中apelin浓度的变化,探讨噻唑烷二酮类药物对脂肪组织内分泌功能的影响机制。方法分别用含有四个不同浓度的吡咯列酮的基础培养液进行前脂肪细胞的体外培养,48小时后用ELISA法检测细胞上清液apelin浓度,MTT法检测细胞增殖情况,寻找有效的吡格列酮干预浓度。根据培养液不同而设立空白对照组A、分化对照组B、实验组C三组,在干预后的第24、48、72小时分别以ELISA法检测培养上清液apelin浓度,并观察细胞增殖、聚脂分化指标。后续于分化第5、10天取三组细胞,测定其油红O染色吸光度值。评价各组处理对前脂肪细胞apelin分泌水平、细胞增殖分化指标的影响。结果1、A、B及C组上清液中可检测到apelin,并随培养时间而变化,B组、C组培养72小时后apelin浓度较A组分别增加了33.7%、32.5%(P<0.05)。2、对细胞分化的影响:油红O染色测定结果表明,吡格列酮浓度分别为10μmol/L,100μmol/L时其吸光度值大于对照组。在第24、48小时,C组油红O染色吸光度值与B组比较无明显差异;第72小时,C组吸光度值高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),但低于B组;而在第10天B、C两组差异不明显(P≥0.05),但与A组比较,其差异仍较明显(P<0.05)。C组培养前脂肪细胞约3天,部分细胞胞浆内可见脂滴,干预5d、10d时能促进前脂肪细胞的胞浆内聚脂,结果较A组分别增加了36.8%、59.8%(P<0.05)。3、对细胞增殖的影响:MTT法检测结果显示,随吡格列酮浓度增加,前脂肪细胞数有增加趋势,100μmol/L吡格列酮明显促进前脂肪细胞的增殖,在24、48、72小时细胞增殖较对照组分别增加了8.1%、20.2%和15.2% (P<0.05)。结论前脂肪细胞可分泌脂肪因子apelin,其表达水平与细胞生长状态有关。吡格列酮可促进前脂肪细胞增殖和分化,促增殖作用呈时间和剂量依赖性,其促分化作用具有时间依赖趋势。吡格列酮可通过调节前脂肪细胞的生长而影响其分泌功能。